乙型肝炎病毒相关蛋白介导Hedgehog信号通路的异常激活并促进肝细胞癌细胞的恶性表型

发布时间：2023-12-02 15:42

　　背景:原发性肝癌(Hepatic carcinoma,HCC)是当今最常见的恶性肿瘤之一,其恶性程度高,治疗效果不理想,死亡率居于恶性肿瘤第三位。我国是肝癌的高发区,全世界每年新发的肝癌约一半发生在中国,而在中国诊断的肝癌患者中,大部分为乙肝相关性肝癌,中国每年大约有30万人因肝癌死亡,对人民健康和国民经济的影响不容小觑。目前肝癌的治疗方法主要是综合治疗,包括手术切除,介入治疗,消融治疗,放疗,化疗,抗病毒治疗以及近几年出现的靶向治疗及免疫治疗,但肝癌患者总体5年生存率约为12%,即使外科手术切除,患者的5年生存率通常低于38%-61%,近年来已无明显改善,肝癌的治疗已达瓶颈期,我们必须从肝癌的发病机制入手重新审视目前的肝癌治疗方案,因此,深入研究肝癌发生发展的分子机制,寻找新的标志物和治疗靶点对肝癌的诊断与治疗有着非常重要的理论和现实意义。Hedgehog(Hh)信号通路在HCC的发展过程中具有复杂的作用,并与多种癌症特征相关。新近发现阻断Hh信号通路延缓乙肝病毒相关蛋白Hbx诱发的肝细胞癌变。近期有研究报道:人乙肝相关性肝癌细胞中Hbx蛋白的表达与Hh通路激活相关;并通过体内、体外...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 前言
    1.1 概述
第2章 Hbx激活Hedgehog信号通路
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系及质粒
        2.1.2 试剂与耗材
    2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 主要试剂配制
        2.3.2 细胞培养
        2.3.3 脂质体转染
        2.3.4 细胞总RNA提取
        2.3.5 逆转录实验
        2.3.6 Real-time PCR
        2.3.7 细胞蛋白的提取及定量
        2.3.8 Western Blot实验
    2.4 实验结果
        2.4.1 高表达Hbx蛋白激活Hh信号通路
        2.4.2 过表达Hbx使 Gli2 基因RNA水平表达增加,感染HBV小鼠的肝脏Gli2 RNA水平表达增加
第3章 Hbx与 Hh信号通路关键靶基因Gli2 的间相互作用
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞系及质粒
        3.1.2 试剂与耗材
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 试剂配置
        3.2.2 真核表达载体的构建
        3.2.3 质粒DNA的提取
        3.2.4 蛋白质免疫共沉淀实验
        3.2.5 荧光素酶报告基因实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 Hbx与 Gli2 有直接相互作用
        3.3.2 Hbx为 Gli2 上游靶基因,可上调Gli2 表达
第4章 过表达Hbx促进肝癌细胞增殖侵袭迁移
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞系及质粒
        4.1.2 主要耗材与试剂
        4.1.3 主要实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 试剂配置
        4.2.2 细胞培养
        4.2.3 慢病毒技术构建稳定过表达Hbx细胞系(Huh7)
        4.2.4 细胞增殖曲线实验
        4.2.5 平板克隆形成实验
        4.2.6 EdU细胞增殖检测实验
        4.2.7 细胞迁移实验
        4.2.8 细胞侵袭实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 Hbx提高体外肝癌细胞的增殖能力
        4.3.2 Hbx促进肝癌细胞的侵袭和迁移
第5章 结论与讨论
    5.1 结论
    5.2 讨论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3869971