结核相关抗原对初治结核病患者树突状细胞的免疫调节作用的研究

发布时间：2017-05-25 22:12

  本文关键词：结核相关抗原对初治结核病患者树突状细胞的免疫调节作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:采用脂多糖(lipopolysaccharides,简称LPS)、卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)和结核分支杆菌特异性抗原Ag85b(以下简称Ag85b)刺激体外培养六天的初治结核病患者外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DCs),通过观察DCs表面标志CD86、CD83、CD11c、HLA-DR的表达量及所分泌的细胞因子IL-12、IL-10、IFN-γ含量的变化,观察三种抗原对初治结核患者DCs免疫功能的影响的差异,寻求调节初治结核病患者外周血DCs免疫功能的最佳抗原,为开发治疗结核病的新型免疫治疗方法提供科学依据。方法:1收集石家庄市第五医院新入院治疗的初治结核病患者31例,均符合《临床诊疗指南-结核病分册》的诊断标准。收集健康体检者26例作为正常对照组。2无菌采集结核病患者和健康体检者外周血10ml,经密度梯度离心分离出单个核细胞,分成四组,即:空白对照组、LPS组、BCG组、Ag85b组。贴壁3h后去除非贴壁细胞,将贴壁细胞放在5%CO2、37℃培养箱中培养。隔天半量换液,于第6d换液后,其中一组不加刺激物,其余三组分别采用LPS、BCG、Ag85b对细胞进行干预,第7d收集细胞。在培养期间观察细胞的形态、大小及生长情况,并拍照记录。3用流式细胞仪检测各组DCs的CD83、CD86、HLA-DR和CD11c的表达率。4采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组DCs培养上清中的IL-12、IL-10、INF-γ的含量。5应用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析,所有数据用均数±标准差(x±s)表示,组间及组内采用单因素方差分析,P0.05为差别有统计学意义。结果:1各组外周血DCs形态:初治结核病患者DCs生长密度比正常对照组低,形态也不及正常对照组典型,经三种抗原刺激后,各组DCs胞体饱满,生长旺盛,具有典型树突状结构。2各组外周血DCs表面标志的检测结果:2.1各组DCs的CD83的表达:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组和Ag85b组的外周血DCs的CD83的表达结果分别为(10.52±7.36)%、(15.01±9.01)%、(11.91±7.91)%、(11.72±6.88)%;初治结核病患者分别为(4.93±2.67)%、(11.42±9.51)%、(8.25±6.7)%、(9.16±8.78)%。初治结核病患者的空白对照组CD83的表达率显著低于健康体检者的空白对照组(P=0.001),健康体检者的LPS组CD83的表达与其空白对照组比较显著增多(P=0.042),初治结核病患者的LPS组和Ag85b组与其空白对照组比较显著增多(P=0.001;0.026)。2.2各组DCs的CD86的表达:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组和Ag85b组的外周血DCs的CD86的表达结果分别为(74.22±15.84)%、(82.98±11.57)%、(75.5±15.31)%、(81±10.69)%;初治结核病患者分别为(68.47±15.23)%、(81.48±13.1)%、(75.5±15.31)%、(81±10.69)%。健康体检者的LPS组CD86的表达与其空白对照组比较显著增多(P=0.025);初治结核病患者中,LPS组和Ag85b组较空白对照组显著增多(P=0.001;0.007)。2.3各组DCs的HLA-DR的表达:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组和Ag85b组的外周血DCs的HLA-DR的表达结果分别为(84.42±12.06)%、(88.98±8.3)%、(87.34±9.4)%、(88.22±9.86)%,初治结核病患者分别为(81.77±8.37)%、(90.34±6.35)%、(85.1±7.45)%、(85.1±9.93)%。初治结核病患者LPS组与其空白对照组、BCG组和Ag85b组相比显著增高(P0.001;P=0.02;0.033)。2.4各组DCs的CD11c的表达:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组和Ag85b组的外周血DCs的CD11c的表达结果分别为(90.02±7.23)%、(89.61±8.26)%、(88.63±9.66)%、(88.87±10.47)%;初治结核病患者分别为(91.35±5.96)%、(90.54±6.34)%、(90.38±7.67)%、(91.07±6.06)%。初治结核病患者与健康体检者各组间比较均无显著性差异(P0.05)。3各组DCs细胞培养上清中细胞因子的检测结果:3.1各组DCs培养上清IL-12的含量:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组和Ag85b组外周血DCs培养上清IL-12的含量分别为(39.00±36.78)pg/ml、(31.50±20.27)pg/ml、(33.79±26.65)pg/ml、(27.07±20.55)pg/ml;初治结核病患者分别为(30.11±28.70)pg/ml、(27.8±18.21)pg/ml、(21.94±16.70)pg/ml、(22.80±16.05)pg/ml。初治结核病患者各组间比较均无显著性差异(P0.05),健康体检者各组间比较亦均无显著性差异(P0.05)。3.2各组DCs培养上清IL-10的含量:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组、Ag85b组外周血DCs培养上清IL-10的含量分别为(5.98±5.47)pg/ml、(11.37±11.27)pg/ml、(6.67±5.65)pg/ml、(6.28±5.91)pg/ml;初治结核病患者分别为(2.13±2.01)pg/ml、(10.29±10.1)pg/ml、(1.98±1.53)pg/ml、(2.99±2.87)pg/ml。初治结核病患者空白对照组IL-10的含量显著低于健康体检者的空白对照组(P=0.02),在初治结核病患者中,LPS组IL-10的含量显著高于空白对照组、BCG组和Ag85b组(P0.001);健康体检者中的LPS组含量亦均显著高于其他三组(P=0.003;0.009;0.005)。3.3各组DCs培养上清IFN-γ的含量:健康体检者空白对照组、LPS组、BCG组、Ag85b组外周血DCs培养上清IFN-γ的含量分别为(7.02±6.41)pg/ml、(8.82±8.27)pg/ml、(11.01±10.75)pg/ml、(12.03±11.89)pg/ml;初治结核病患者分别为(6.92±5.86)pg/ml、(12.45±11.86)pg/ml、(21.08±20.51)pg/ml、(15.44±14.39)pg/ml。经三种抗原刺激后,初治结核病患者和健康体检者IFN-γ的含量均升高,且初治结核病患者升高幅度高于健康体检者。在初治结核病患者中,BCG组和Ag85b组IFN-γ的含量显著高于空白对照组(P0.001;P=0.004)。结论:1初治结核病患者免疫功能低下可能是由于DCs成熟功能显著降低造成的。2 LPS可以显著提高结核病患者外周血DCs的成熟度和抗原递呈能力,但会增加细胞因子IL-10的分泌。3 BCG在提高结核病患者外周血DCs的成熟度和抗原递呈能力方面较弱,在促进IFN-γ分泌的能力方面较强。4 Ag85b在增强结核病患者外周血DCs的成熟度和抗原递呈能力及促进DCs分泌IFN-γ方面均有较好的效果。
【关键词】：树突状细胞 结核病 脂多糖 卡介苗 Ag85B 细胞因子 流式细胞术
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R52
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文缩写12-13
• 前言13
• 材料与方法13-19
• 结果19-22
• 附图22-33
• 附表33-35
• 讨论35-38
• 结论38
• 参考文献38-41
• 综述41-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 个人简历50

【共引文献】

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本文编号：395169