药物干预对泡型包虫病小鼠肝脏药物代谢酶的影响

发布时间：2017-08-16 09:06

  本文关键词：药物干预对泡型包虫病小鼠肝脏药物代谢酶的影响

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【摘要】：目的:本文以感染多房棘球蚴的长爪沙鼠和Balb/c小鼠为动物模型,分别研究了多房棘球蚴的感染对宿主肝脏药物代谢酶活性的影响,以及药物干预对泡型包虫病Balb/c小鼠肝脏药物代谢酶的调控作用。方法:用差速离心法制备肝微粒体悬液及细胞液,用二喹啉甲酸(BCA)法测定两者的蛋白浓度,继而用差示光谱法测定微粒体中细胞色素P450(CYP450)和细胞色素b5(Cyt b5)的含量,用荧光分光光度法测定7-乙氧基试卤灵脱乙基酶(EROD)、7-甲氧基试卤灵脱甲基酶(MROD)、7-戊氧基试卤灵脱戊基酶(PROD)的活性,用紫外-可见光分光光度法测定NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和黄素单加氧酶(FMO)的活性。同时,通过测定泡球蚴组织块的湿重来评价阿苯达唑(ABZ)和3-溴丙酮酸(3-BrPA)的抗包虫效果,并用实时荧光定量PCR技术测定Balb/c小鼠肝脏组织中CYP1A1、CYP1A2、CYP2B10、CYP2E1、FMO1、FMO2、FMO3和GST基因mRNA的表达量。结果:1)在感染多房棘球蚴后,沙鼠和Balb/c小鼠肝脏中CYP450的含量均显著降低(p0.05)。而沙鼠被感染后Cyt b5的含量也显著降低(P0.05),Balb/c小鼠肝脏中Cyt b5的含量虽有所降低,但与对照组相比没有显著性差异(P0.05)。酶活性测定结果显示沙鼠和Balb/c小鼠被多房棘球蚴感染后,肝脏中CPR的活性均显著升高(P0.05),GST的活性则显著降低(P0.05),EROD和MROD的活性没有变化(P0.05)。然而,FMO的活性在被感染的沙鼠体内显著升高(P0.05),在被感染的Balb/c小鼠体内则没有明显的变化。2)感染多房棘球蚴的Balb/c小鼠在口服阿苯达唑和3-溴丙酮酸六周后均呈现较强的抗泡球蚴效果(P0.05),虽然阿苯达唑的抑囊率高于3-溴丙酮酸,但二者没有显著性差异(P0.05)。当治疗时间增加至十周后,阿苯达唑的抗泡球蚴效果明显优于3-溴丙酮酸(P0.05)。3)与模型对照组相比,感染多房棘球蚴的Balb/c小鼠在口服阿苯达唑之后,Cyt b5的含量增加(P0.05),EROD、MROD和PROD的活性显著升高(P0.05),CPR和GST的活性显著降低(P0.05),FMO的活性没有变化(P0.05);口服3-溴丙酮酸后,Cyt b5的含量增加(P0.05),CPR和GST的活性降低(P0.05),但是EROD、MROD和PROD的活性没有明显变化(P0.05)。4)感染多房棘球蚴的Balb/c小鼠在口服阿苯达唑后,其肝脏中CYP1A1和CYP1A2的mRNA含量显著升高(P0.05),FMO3和GST的mRNA含量降低(P0.05),CYP1A2、CYP2B10、CYP2E1、FMO1和FMO2的mRNA含量则没有变化(P0.05);而在口服3-溴丙酮酸后,FMO3和GST的含量降低(P0.05),其余所测基因的mRNA含量没有变化(P0.05)。结论:多房棘球蚴的感染会改变宿主肝脏药物代谢酶的活性,并且药物代谢酶活性的改变具有种族差异性。阿苯达唑和3-溴丙酮酸治疗泡型包虫病Balb/c小鼠时,二者均会在转录水平改变肝脏药物代谢酶亚型的表达,同时会影响Balb/c小鼠肝脏中部分药物代谢酶的活性。
【关键词】：多房棘球蚴 药物代谢酶 阿苯达唑 3-溴丙酮酸
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.32
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩略词表7-12
• 第一章 绪论12-24
• 1.1 包虫病的简介12-16
• 1.1.1 包虫病的危害12-14
• 1.1.2 包虫病的诊断和治疗14
• 1.1.3 治疗包虫病常用药物阿苯达唑14-15
• 1.1.4 治疗包虫病候选药物 3-溴丙酮酸15-16
• 1.2 肝药酶简介16-21
• 1.2.1 肝药酶及其研究意义16-17
• 1.2.2 CYP450和Cytb517-20
• 1.2.3 FMO20-21
• 1.2.4 GST21
• 1.3 肝药酶研究意义21-22
• 1.4 寄生虫感染对宿主肝药酶的影响22
• 1.5 药物干预对肝脏药物代谢酶的影响22-23
• 1.6 研究目的23-24
• 第二章 多房棘球蚴的感染对宿主肝脏药物代谢酶活性的影响24-35
• 2.1 引言24
• 2.2 材料24-25
• 2.2.1 实验动物24-25
• 2.2.2 实验试剂25
• 2.2.3 实验仪器25
• 2.3 方法25-29
• 2.3.1 动物模型构建25-26
• 2.3.2 细胞液及肝微粒体悬液的制备[65]26-27
• 2.3.3 细胞液及肝微粒体悬液蛋白浓度测定27
• 2.3.4 CYP450和Cyt b5含量的测定27-28
• 2.3.5 沙鼠和Balb/C小鼠肝脏药物代谢酶活性测定28-29
• 2.3.6 统计学分析29
• 2.4 结果29-33
• 2.4.1 细胞液及微粒体悬液的蛋白浓度29-30
• 2.4.2 CYP450和Cyt b5含量的测定30-31
• 2.4.3 药物代谢酶活性测定结果31-33
• 2.5 讨论33-35
• 第三章 药物干预对泡型包虫病Balb/c小鼠肝脏药物代谢酶活性的影响35-48
• 3.1 引言35-36
• 3.2 材料36
• 3.2.1 实验动物36
• 3.2.2 实验试剂36
• 3.2.3 实验仪器36
• 3.3 方法36-38
• 3.3.1 动物模型构建及分组36-37
• 3.3.2 阿苯达唑及3-溴丙酮酸体内抗泡球蚴作用37
• 3.3.3 细胞液及肝微粒体悬液的制备37
• 3.3.4 细胞液及肝微粒体悬液蛋白浓度测定37
• 3.3.5 Cytb5含量的测定37
• 3.3.6 Balb/C小鼠肝脏药物代谢酶活性测定37
• 3.3.7 统计学分析37-38
• 3.4 结果38-45
• 3.4.1 阿苯达唑和 3-溴丙酮酸体内抗泡球蚴作用38-39
• 3.4.2 细胞液及微粒体悬液的蛋白浓度39-40
• 3.4.3 Cyt b5含量的测定40-41
• 3.4.4 药物代谢酶活性测定结果41-45
• 3.5 讨论45-48
• 第四章 药物干预对泡型包虫病Balb/c小鼠肝脏药物代谢酶亚型基因表达的调控作用48-63
• 4.1 引言48
• 4.2 材料48-49
• 4.2.1 实验动物48
• 4.2.2 实验试剂48-49
• 4.2.3 实验仪器49
• 4.3 方法49-54
• 4.3.1 溶液的配制49-50
• 4.3.2 动物模型的处理及分组50
• 4.3.3 肝脏Total-RNA的提取50-51
• 4.3.4 Total-RNA质量的鉴定51-52
• 4.3.5 逆转录反应，即cDNA第一链的合成52
• 4.3.6 实时荧光定量PCR（Quantitive real-time PCR）52-54
• 4.3.7 数据处理统计学分析54
• 4.4 结果54-61
• 4.4.1 Balb/C小鼠肝脏组织Total-RNA的提取54-55
• 4.4.2 各基因实时荧光定量PCR的溶解曲线和扩增曲线55-56
• 4.4.3 实时荧光定量PCR产物鉴定56
• 4.4.4 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中CYP1A1 mRNA表达的影响56-57
• 4.4.5 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中CYP1A2 mRNA表达的影响57
• 4.4.6 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中CYP2B10 mRNA的表达影响57-58
• 4.4.7 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中CYP2E1 mRNA表达的影响58
• 4.4.8 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中FMO1 mRNA表达的影响58-59
• 4.4.9 药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中FMO2 mRNA表达的影响59-60
• 4.4.10药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中FMO3 mRNA表达的影响60
• 4.4.11药物干预对泡型包虫病Balb/C小鼠肝脏中GST mRNA表达的影响60-61
• 4.5 讨论61-63
• 第五章 结论和展望63-65
• 5.1 结论63
• 5.2 展望63-65
• 参考文献65-74
• 在学期间的研究成果74-75
• 致谢75

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