中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析

发布时间：2017-08-21 22:09

  本文关键词：中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析

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【摘要】：目的克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据。方法结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段。将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析。利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性。并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,Western blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应。ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2%低于全菌蛋白的灵敏度92.8%(P0.001);特异性分别为73.3%、68.9%,差异无统计学意义(P=0.511)。在检测梅毒血清上特异性分别为83.3%、18.9%,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P0.001)。结论重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室;
【关键词】： 莱姆病螺旋体 VlsE蛋白 克隆表达 抗原性分析
【基金】：国家科技重大专项(No.2013ZX10004-001,No.2013ZX10004-101)~~
【分类号】：R514
【正文快照】： 莱姆病是一种蜱传的人兽共患病,其病原体为伯氏疏螺旋体。莱姆病临床征状包括:游走性红斑,面神经麻痹,神经根炎,心脏病,关节炎和慢性萎缩性肢皮炎等,严重的导致终身残疾,甚至死亡[1]。因为莱姆病的临床症状复杂多样,所以莱姆病的实验室辅助诊断尤为重要。目前莱姆病的实验室诊

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本文编号：715384