新型多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162的研究

发布时间：2017-09-24 00:13

  本文关键词：新型多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162的研究

  更多相关文章： 多房棘球蚴病 霍乱毒素 B 亚基 CTB-Emy162 亚单位疫苗

【摘要】：目的构建融合基因CTB-Emy162原核表达系统,纯化得到融合蛋白。建立多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162的动物模型,观察亚单位疫苗CTB-Emy162免疫原性和抗原性。方法根据多房棘球蚴抗原Emy162在Gen Bank中的序列,用OptimumTM Codon软件优化Emy162,从而获得适合大肠杆菌BL-21表达的Emy162基因序列。PCR扩增Emy162基因,利用分子生物学技术与免疫佐剂霍乱毒素B亚基(CTB)相偶联。设计出一个科学合理的亚单位疫苗CTB-Emy162。构建CTB和Emy162双基因原核表达质粒p ET-28a-CTB-Emy162,将该质粒转化于E.coli BL-21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达后,利用Ni-NTA柱亲和层析结合离子交换色谱法纯化后获得的蛋白。在获得蛋白CTB-Emy162基础上,建立实验组及对照组的动物模型:将纯化后的重组蛋白CTB-Emy162免疫SPF级BALB/c小鼠作为实验组,PBS免疫作为对照组。采用脾淋巴细胞增殖、ELISA等方法确证重组蛋白CTB-Emy162的免疫原性和特异性。结果成功构建重组蛋白CTB-Emy162的原核表达载体,并获得纯化后的重组蛋白CTB-Emy162。经脾淋巴细胞增殖实验、ELISA等分子生物学和免疫学方法证实CTB-Emy162有良好的免疫原性和抗原活性。结论经原核表达的多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162具有良好抗原性和免疫效果,有可能为预防和治疗多房棘球蚴病提供新的疫苗。
【关键词】：多房棘球蚴病 霍乱毒素 B 亚基 CTB-Emy162 亚单位疫苗
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.3
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 主要符号对照表10-11
• 第1章 引言11-14
• 1.1 棘球绦虫和棘球蚴病11
• 1.2 棘球蚴病的流行范围和特点11-12
• 1.3 棘球蚴病的诊疗现状12-14
• 第2章 多房棘球蚴抗原Emy162序列获得与优化14-21
• 2.1 实验材料14-16
• 2.1.1 实验材料14
• 2.1.2 主要试剂14-15
• 2.1.3 试剂配制15
• 2.1.4 实验仪器15-16
• 2.2 实验方法16-17
• 2.2.1 Emy162序列的获得及优化16
• 2.2.2 Emy162核苷酸序列的基因合成16-17
• 2.2.3 PCR产物的回收17
• 2.3 实验结果17-19
• 2.3.1 Emy162序列的优化17-18
• 2.3.2 Emy162基因的c DNA序列的扩增18-19
• 2.4 讨论19-20
• 2.5 结论20-21
• 第3章 多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162载体构建21-32
• 3.1 实验材料21-23
• 3.1.1 Emy162氨基酸序列21
• 3.1.2 免疫佐剂霍乱毒素B亚基（CTB）21-22
• 3.1.3 质粒的获取22
• 3.1.4 主要试剂22-23
• 3.1.5 实验仪器23
• 3.2 实验方法23-26
• 3.2.1 CTB-Emy162间隔序列选择及偶联设计23-24
• 3.2.2 重组表达载体p ET-CTB-Emy162的构建24-26
• 3.2.2.1 Emy162基因的合成24
• 3.2.2.2 Emy162重组质粒载体构建24-25
• 3.2.2.3 重组质粒p ET-CTB-Emy162的鉴定25-26
• 3.3 实验结果26-30
• 3.3.1 CTB-Emy162间隔序列选择及偶联设计26
• 3.3.2 亚单位疫苗CTB-Emy162偶联设计26-27
• 3.3.3 亚单位疫苗CTB-Emy162间隔序列设计27-28
• 3.3.4 重组质粒载体p ET-CTB-Emy162的构建28-30
• 3.3.4.1 经优化后的基因Emy162的合成28
• 3.3.4.2 载体p ET-CTB-Emy162的构建及鉴定28-29
• 3.3.4.3 载体p ET-CTB-Emy162的核苷酸测序29-30
• 3.4 讨论30-31
• 3.5 结论31-32
• 第4章 多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162的表达与纯化32-40
• 4.1 实验材料32-34
• 4.1.1 主要试剂32-33
• 4.1.2 主要溶液及配方33-34
• 4.1.3 实验仪器34
• 4.2 实验方法34-36
• 4.2.1 基因工程菌株的诱导表达及鉴定34-35
• 4.2.1.1 重质粒p ET-CTB-Emy162的转化34-35
• 4.2.1.2 基因工程重组菌株的诱导35
• 4.2.1.3 重组蛋白CTB-Emy162的分离、表达部位及形式的鉴定35
• 4.2.1.4 诱导表达产物的SDS-PAGE电泳检测35
• 4.2.2 重组蛋白CTB-Emy162的Ni-NTA柱纯化35-36
• 4.2.3 重组蛋白CTB-Emy162的透析复性和浓缩36
• 4.3 实验结果36-38
• 4.3.1 基因工程菌株的诱导表达及鉴定36-37
• 4.3.2 重组蛋白CTB-Emy162的Ni-NTA亲和层析纯化37-38
• 4.4 讨论38-39
• 4.5 结论39-40
• 第5章 多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162免疫性研究40-50
• 5.1 实验材料40-42
• 5.1.1 CTB-Emy162等蛋白的获取40
• 5.1.2 实验动物40
• 5.1.3 主要试剂40-41
• 5.1.4 主要溶液及配方41-42
• 5.1.5 实验仪器42
• 5.2 实验方法42-44
• 5.2.1 BALB/c小鼠的免疫接种42-43
• 5.2.2 CTB-Emy162与GM1的结合活性43
• 5.2.3 ELISA检测特异性抗体43
• 5.2.4 小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验43-44
• 5.3 实验结果44-48
• 5.3.1 亚单位疫苗CTB-Emy162与GM1结合活性的检测44-45
• 5.3.2 CTB-Emy162特异性抗体的检测45-46
• 5.3.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应的检测46-47
• 5.3.4 Ig G1、Ig G2a和Ig A特异性抗体的检测47-48
• 5.4 讨论48-49
• 5.5 结论49-50
• 全文总结50-51
• 不足与创新51-52
• 参考文献52-64
• 致谢64-65
• 综述65-76
• 参考文献71-76
• 作者简介76

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈明,王芳;犬定期驱虫对棘球蚴病控制的调查研究[J];兰州医学院学报;2001年01期

2 徐霞;舌囊性棘球蚴病提示患多部位该病患者的诊断[J];国外医学(寄生虫病分册);2003年01期

3 徐霞;南部以色列的穆斯林和犹太人群中囊性棘球蚴病的流行[J];国外医学(寄生虫病分册);2003年05期

4 曹得萍,史大中;二十五味铜灰散治疗小鼠继发性棘球蚴病的实验研究[J];青海医学院学报;2003年03期

5 乐美兆,陆海军,李祥周;肝巨大囊状棘球蚴病1例[J];中国寄生虫病防治杂志;2004年03期

6 徐成峰 ,赵亚;哈萨克斯坦农业耕作改变引起的棘球蚴病流行病学变化[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年06期

7 许静;一种棘球蚴病斑点免疫结合试验的诊断价值研究[J];国外医学(寄生虫病分册);2005年05期

8 牛红峰;;原发性脾棘球蚴病1例报道[J];国外医学(寄生虫病分册);2005年06期

9 余森海;;棘球蚴病防治研究的国际现状和对我们的启示[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2008年04期

10 万功群;王用斌;尹克霞;赵长磊;刘新;;山东省棘球蚴病调查结果分析[J];中国热带医学;2010年01期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 李伟;;青海高原棘球蚴病流行与研究概况[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

2 阳爱国;;四川省家畜棘球蚴病流行及防制[A];四川省动物学会第八次会员代表大会暨第九次学术年会论文集[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 李增科;棘球蚴病的危害及检疫[N];青海日报;2001年

2 家启;反刍动物棘球蚴病的防治[N];中国畜牧兽医报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 王慧;棘球蚴囊液蛋白质组学及主要分泌蛋白对宿主免疫调节的影响[D];新疆医科大学;2015年

2 邹晓毅;高强度聚焦超声波杀伤细粒棘球绦虫棘球蚴的研究[D];重庆医科大学;2009年

3 王俊安;高强度聚焦超声（HIFU）杀伤细粒棘球蚴的研究[D];重庆医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李建秋;多房棘球蚴Em95基因克隆、原核表达及应用[D];中国农业科学院;2015年

2 肖云霞;阿拉山口鼠棘球蚴病本底调查及媒介生物性传染病风险分析系统的建立[D];石河子大学;2015年

3 余大为;甘肃省棘球蚴病流行因素分析[D];兰州大学;2015年

4 周凤声;青海省果洛藏族自治州班玛县棘球蚴病流行病学调查[D];青海大学;2015年

5 赵月;四川省甘孜藏族自治州棘球蚴病空间聚集性分析[D];中国疾病预防控制中心;2015年

6 周虎;新型多房棘球蚴亚单位疫苗CTB-Emy162的研究[D];青海大学;2016年

7 齐颜凤;四川省阿坝州棘球蚴病分布特征和影响因素研究[D];中国疾病预防控制中心;2013年

8 房琦;青藏高原地区棘球蚴病流行现状及影响因素分析[D];中国疾病预防控制中心;2014年

9 蔡辉霞;青海省果洛藏族自治州儿童棘球蚴病调查[D];中国疾病预防控制中心;2012年

10 曾祥Z，

本文编号：908257