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吩嗪类化合物作用机制的初步研究

发布时间:2017-09-30 22:01

  本文关键词:吩嗪类化合物作用机制的初步研究


  更多相关文章: 分枝杆菌 结核 氯法齐明 耐药 诱导 分枝杆菌 结核 TBI-166 基因芯片


【摘要】:目的利用浓度梯度倍增的氯法齐明(clofazimine,Cfz)体外诱导获得结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)耐药株,并进行耐药机制的初步研究。方法选取Mtb标准株H37RV,从亚最低抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,sub-MIC)(1/8 MIC、1/4MIC、1/2 MIC…)开始,在Cfz浓度倍增的7H11固体培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对Cfz的耐药性,并通过药物敏感性试验和全基因组测序来进行验证;同时利用MABA(Microplate Alamar Blue Assay)法测定诱导耐药菌株对10个抗结核药物(INH、RFP、EMB、Mfx、LZD、Cs、Cm、Bdq、TBI-166、Cfz)的MIC情况。结果Mtb标准株经诱导后对Cfz的MIC值是诱导前的32~64倍(诱导前Cfz的MIC值是0.12μg/ml),对10个抗结核药物敏感性测定显示对贝达喹啉(Bendaquiline,Bdq,TMC207)及TBI-166产生交叉耐药;耐药株在7H9液体培养基中进行无药连续培养10代后,测定其MIC值无明显变化;对该诱导耐药株进行全基因组测序共检测到195个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisma,SNP)突变和19个插入缺失(In Del)突变。结论从亚MIC药物浓度开始,逐渐递增的长期药物刺激能够诱导结核分枝杆菌对氯法齐明的获得性耐药,获得的耐药株耐药性稳定,初步耐药机制分析与外排泵调节及呼吸、代谢过程调节有关。目的检测结核分枝杆菌标准菌株H37Rv经吩嗪类新化合物TBI-166处理前后,其相关基因表达量的变化,探讨该化合物可能存在的抗结核作用机制。方法选取标准菌株H37Rv,培养至对数生长期,分别接种于含TBI-166 4倍最低抑菌浓度诱导培养和含TBI-166 10倍最低抑菌浓度(10MIC)两组7H9液体培养基,前者培养4h和24h,后者培养4h,提取其总RNA,应用基因芯片技术,将不同药物MIC倍数和不同时间处理的菌株进行比对,寻找差异表达的m RNA,分析TBI-166的可能作用位点。结果药物处理4h组与热敏感性、蛋白折叠、蛋白质二硫键氧化酶等功能相关的基因表达量增加,Rv3066、Rv2622、Rv2621c、Rv3418c等表达量上调均在6倍以上;其中10MIC-4h组表达增加的主要功能基因与4MIC-4h组类似,但上调倍数略小。药物处理24h组主要为黄素腺嘌呤二核苷酸结合、芳香族化合物分解过程相关的基因表达量增加,Rv3066上调达26倍。结论Rv3066、Rv2622、Rv2621c、Rv3418c等这些基因的高表达可能与TBI-166的抗结核作用相关,TBI-166可能为这些基因的诱导物而导致其激活并高表达。尚需要对其中某些相关基因进一步进行多方面的验证。
【关键词】:分枝杆菌 结核 氯法齐明 耐药 诱导 分枝杆菌 结核 TBI-166 基因芯片
【学位授予单位】:北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R52
【目录】:
  • 缩略词表5-7
  • 前言7-8
  • 第一部分中文摘要8-9
  • 第一部分英文摘要9-10
  • 第二部分中文摘要10-11
  • 第二部分英文摘要11-13
  • 一.结核分枝杆菌对氯法齐明耐药的体外诱导及其耐药机制的初步研究13-39
  • 1.前言13-14
  • 2.材料和方法14-23
  • 3.结果23-32
  • 4.讨论32-35
  • 5.结论35-36
  • 6.参考文献36-39
  • 二. 吩嗪类新化合物TBI-166抗结核机制的基因表达谱研究39-66
  • 1.前言39-40
  • 2.材料和方法40-50
  • 3.结果50-58
  • 4.讨论58-62
  • 5.结论62-63
  • 6.参考文献63-66
  • 综述一66-81
  • 参考文献76-81
  • 综述二81-94
  • 参考文献89-94
  • 攻读硕士学位期间发表的文章94-95
  • 致谢词95-97
  • 个人简历97

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本文编号:950620

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