细粒棘球蚴感染早期Th9细胞的分布及其因子的表达

发布时间：2017-10-02 17:09

  本文关键词：细粒棘球蚴感染早期Th9细胞的分布及其因子的表达

  更多相关文章： 细粒棘球蚴 脾细胞 Th细胞 IL-9

【摘要】：目的:通过体外细粒棘球蚴原头蚴与小鼠脾细胞共培养,以及建立细粒棘球蚴感染小鼠模型的方法,检测原头蚴是否可以诱导脾脏淋巴细胞Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th9细胞的分化以及相关炎性细胞因子的表达,探讨Th细胞子集是否参与细粒棘球蚴的免疫逃逸,以及不同细胞因子的相互作用可能会导致原头蚴可以逃避宿主的免疫应答作用。方法:1、体外实验取BALB/c小鼠脾细胞制备成脾细胞悬液,原头蚴与小鼠脾细胞悬液共培养12 h、24 h、36 h、48 h后,流式细胞分析仪检测脾细胞中Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞和Th9细胞的数量;加入IL-9共培养48 h后Real-time PCR测定脾细胞IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2、IL-5Rαm RNA的表达;ELISA检测上清液中IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表达。2、体内试验建立小鼠细粒棘球蚴感染模型,BALB/c小鼠随机分组,实验组腹腔接种原头蚴,对照组腹腔接种PBS;分别于第1、5、9天处死小鼠,收集血清、制备脾细胞悬液。流式细胞分析仪检测脾细胞中Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞和Th9细胞的数量;ELISA检测血清IL-9、IL-10、IL-4、IFN-γ、TGF-β、IL-25的表达。结果:1、体外实验建立体外脾细胞与原头蚴共培养模型,脾细胞和原头蚴共培养后Th1细胞在各时间点无统计学差异;在共培养24 h、36 h、48 h后,脾细胞中Th2细胞、Treg细胞含量增加,有统计学差异(P0.05);脾细胞与原头蚴共培养36 h、48 h后,脾细胞中Th9细胞含量增加,有统计学差异(P0.05)。共培养12 h、24 h、48 h时,上清中IL-9表达增加,有统计学差异(P0.05);其IL-10、IL-4、TGF-β逐渐升高,在共培养12 h-48 h后升高有统计学差异(P0.05);IFN-γ先增加后减少有统计学差异(P0.05);IL-25在共培养24 h时增加有统计学差异(P0.05)。加入IL-9共培养48 h后,IL-9Rα、RORα、IL-4Rα、IL-13Rα2的m RNA表达增加有统计学差异(P0.05)。2、体内实验建立小鼠细粒棘球蚴原头蚴感染模型。脾细胞中Th1细胞的含量在感染后9天升高(P0.05);脾细胞中Th9细胞、Th2细胞、Treg细胞的含量在感染后5、9天升高(P0.05);IL-9、IFN-γ在感染后第5、9天表达升高(P0.05);IL-10、PU.1、TGF-β和IL-25在感染后第1、5、9天表达升高(P0.05);IL-4在感染后第1、5天表达升高(P0.05);蛋白水平与m RNA水平基本一致。结论:原头蚴能刺激小鼠脾细胞向Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞和Th9细胞分化且上调相应细胞因子的分泌,这些细胞类型和细胞因子可能相互作用从而影响宿主的免疫应答,进而提示这些亚群细胞可能在包虫病感染的免疫逃逸中发挥一定作用,导致感染的慢性化。
【关键词】：细粒棘球蚴 脾细胞 Th细胞 IL-9
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.32
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 缩略语表11-12
• 前言12-15
• 第一部分：细粒棘球蚴的原头蚴与脾细胞体外共培养早期Th9细胞及其它Th细胞亚群及相关炎性细胞因子的变化15-33
• 1 材料15-17
• 1.1 主要仪器和试剂15-17
• 1.2 主要病原体采集及小鼠来源17
• 2 方法17-23
• 2.1 原头蚴的采集，，培养，活性鉴定17
• 2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液制备17-18
• 2.3 体外建立原头蚴感染模型18-19
• 2.4 流式染色及检测19
• 2.5 ELISA法检测共培养上清液中细胞因子的含量19-20
• 2.6 试剂盒法提取检测细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠脾细胞总RNA20-21
• 2.7 RNA逆转录合成c DNA21
• 2.8 引物合成21-22
• 2.9 实时荧光定量PCR检测细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠脾细胞各炎症相关细胞因子受体基因的表达22-23
• 2.10 统计学分析23
• 3 结果23-31
• 3.1 早期体外不同时间点小鼠脾细胞和原头蚴共培养，小鼠脾细胞中Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th9细胞的百分含量23-26
• 3.2 早期体外不同时间点脾细胞和原头蚴共培养上清液中Th9细胞相关细胞因子蛋白水平的表达26-30
• 3.3 早期体外混合培养脾细胞和原头蚴以及加入IL-9 共培养 48 h后炎症细胞因子m RNA水平的表达30-31
• 4 讨论31-33
• 第二部分：体内小鼠细粒棘球蚴原头蚴感染早期Th9细胞以及其它Th细胞亚群及相关炎性细胞因子的变化33-47
• 1 材料及试剂(同第一部分）33
• 2 方法33-35
• 2.1 原头蚴的采集、培养、活性鉴定（同第一部分）33
• 2.2 建立细粒棘球蚴原头蚴感染小鼠动物模型33
• 2.3 外周血的采集及处理保存33
• 2.4 小鼠脾单个核细胞的制备33
• 2.5 流式细胞染色及检测33-34
• 2.6 ELISA法检测细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠外周血中各炎症相关细胞因子含量34
• 2.7 试剂盒法提取检测细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠脾细胞总RNA（同第一部分）34
• 2.8 RNA逆转录合成c DNA（同第一部分）34
• 2.9 引物合成34-35
• 2.10 实时荧光定量PCR检测细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠脾细胞各炎症相关细胞因子基因的表达（同第一部分）35
• 2.11 统计学分析（同第一部分）35
• 3 结果35-44
• 3.1 早期细粒棘球蚴原头蚴感染小鼠后不同时间脾细胞中Th9细胞及其它Th细胞亚群的比例变化35-39
• 3.2 细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠不同时间Th9细胞及其他Th亚群细胞相关的炎性细胞因子m RNA水平表达升高39-41
• 3.3 细粒棘球蚴原头蚴早期感染小鼠不同时间Th9细胞及其它Th亚群细胞相关的炎性细胞因子蛋白水平表达增加41-44
• 4 讨论44-47
• 结论47-48
• 参考文献48-51
• 综述51-58
• 参考文献55-58
• 致谢58-59
• 作者简介59-60
• 导师评阅表60

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本文编号：960793