猪轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

发布时间：2017-10-12 18:06

  本文关键词：猪轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

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【摘要】：为了建立一种适用于猪轮状病毒(PoRV)的逆转录-环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)的快速、灵敏检测方法。依据GenBank上登录的PoRV VP7基因保守序列,设计了6条特异性引物,通过对外引物与内引物浓度比、Bst DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和反应条件等进行优化。结果显示,当外引物与内引物浓度比为200nmol/L∶2 400nmol/L(1∶12)、Bst DNA聚合酶浓度为0.64 U/μL、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、dNTP浓度为1.0mmol/L,在恒温(60℃)条件下作用60min,扩增效果出现明显"梯状"条带,同时对建立的RT-LAMP检测方法进行特异性和敏感性验证,其只有PoRV获得特异性扩增条带,与其他猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒等无交叉反应,具有良好的特异性,最低检测分子拷贝数为1.0×102拷贝/μL,具有极高的敏感性。反应结束后肉眼可见阳性扩增产物出现白色沉淀,加入SYBR GreenⅠ观察颜色变化可以判定结果。该方法适用于野外、基层部门和海关快速检测PoRV的新方法,在临床上有良好的推广意义。
【作者单位】： 贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病研究室;贵州省动物疫病预防控制中心;
【关键词】： 猪轮状病毒(PoRV) RT-LAMP 建立 应用
【基金】：贵州省科学技术厅农业攻关项目(黔科合NY[2015]3009-1号) 贵州省生猪质量安全工程技术研究中心建设项目(黔科合农C字[2011]4022号) “贵州省动物疫病防控与兽医公共卫生保障科技创新人才团队”(黔科合人才团队[2015]4016号)
【分类号】：S852.651
【正文快照】： 猪轮状病毒(Porcine Rotarvirus,PoRV)属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属成员之一,为各种幼龄动物发生腹泻的主要病原之一[1]。猪感染PoRV后以腹泻、脱水、呕吐、消瘦为主要特征[2]。各年龄的猪均易感,尤其以1周龄以内仔猪感染后症状最为严重,病死率可达100%,一旦暴发即可能呈地方

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本文编号：1020157