广东地区葡萄球菌中耐药基因cfr的流行性研究

发布时间：2017-10-14 05:23

  本文关键词：广东地区葡萄球菌中耐药基因cfr的流行性研究

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【摘要】：葡萄球菌是最常见的化脓性球菌,也是医院交叉感染的重要来源之一,可以对人类和畜牧业造成严重的危害。近年来随着抗菌药物的滥用和多重耐药基因cfr在动物源菌株中的广泛传播,致使动物源葡萄球菌耐药现状备受关注。本论文对广东不同地区猪场中动物源和密切接触者携带cfr的葡萄球菌的流行特征及是否存在cfr阳性菌株的克隆传播进行了初步研究,旨在为指导临床合理应用抗菌药物,减缓耐药性传播提供一定的理论依据。2013年从猪场采集1000份猪及其密切接触者鼻拭子和肛门拭子样品,用甘露醇氯化钠琼脂培养基分离出995株革兰氏阳性菌株,采用PCR检测到到96株携带cfr的阳性菌株。采用镜检和MALDI-TOF-MS仪器鉴定携带cfr的阳性菌,检测到36株为葡萄球菌,检测率为3.6%(36/995)。其中,34株来源于猪,另外2株来源于人。通过PCR测定葡萄球菌的gap以及16S rRNA基因,对36株携带cfr葡萄球菌菌株进行进一步菌种鉴定。结果表明这36株主要为松鼠葡萄球菌(n=18),其次为腐生葡萄球菌(n=5),科氏葡萄球菌(n=4),阿尔莱葡萄球菌(n=3),缓慢葡萄球菌(n=1),木糖葡萄球菌(n=1),马胃葡萄球菌(n=1),另外还检测到1株金黄色葡萄球菌。采用琼脂稀释法测定36株携带cfr的葡萄球菌对临床常用的12种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果表明,36株携带cfr的葡萄球菌对临床常用的多种药物均呈现出不同程度的耐药性。耐药率较高的依次有四环素、氨苄西林、克林霉素、头孢噻呋以及氟苯尼考,其耐药率依次为83.33%、77.78%、77.78%、75%以及75%。其余氯霉素、沃尼妙林、苯唑西林、红霉素、庆大霉素以及环丙沙星的耐药率分别为69.44%、63.89%、63.89%、52.78%、50%以及38.89%,而利奈唑胺较为敏感,其耐药率仅为5.56%。另外,耐甲氧西林葡萄球菌共有21株,占58.33%,还发现1株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。36株携带cfr的葡萄球菌,有30株对3~12种受试药物耐药,表明多重耐药性现象严重。采用PCR方法检测36株携带cfr的葡萄球菌中其它耐药基因,如fexA、ermA、ermB、ermC以及tetM、tetA和tetB。结果显示在36株携带cfr的葡萄球菌中有23株携带fexA基因,未检测到ermA、ermB、ermC、tetM、tetA及tetB基因。采用Sma-I PFGE对36株cfr阳性葡萄球菌进行亲缘关系分析。结果显示30株分型成功,PFGE图谱呈现多样性,其中16株松鼠葡萄球菌分为12个组群(90%相似度),表明cfr阳性葡萄球菌多为为非克隆菌株,呈现多样化的遗传背景。但是,也发现克隆传播菌株,如来自于同一养殖场的腐生葡萄球菌菌株328和371,其中菌株328来源于猪,而菌株371来源于人以及来自于不同养殖场松鼠葡萄球菌菌株251和283的PFGE图谱呈现相似度为100%。综上所述,我国广东不同地区猪场中动物源和密切接触者中携带cfr葡萄球菌存在较低的流行性(3.6%),携带cfr葡萄球菌对苯唑西林耐药率较高(63.89%),而对利奈唑胺耐药率较低(5.56%),多重耐药情况较严重,表明cfr阳性葡萄球菌呈现多样化的遗传背景,但也存在克隆传播。在同一养殖场,人与猪之间可能存在cfr阳性菌株的克隆传播,存在威胁人类健康的可能。
【关键词】：猪场 葡萄球菌 cfr 流行特征
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.611
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩略语7-10
• 1 前言10-14
• 1.1 葡萄球菌10-11
• 1.2 cfr基因的研究现状11-12
• 1.3 PFGE在分子生物学中的应用12-13
• 1.4 本课题的研究意义13-14
• 2 材料与方法14-31
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 样品来源14
• 2.1.2 质控菌14
• 2.1.3 药物14
• 2.1.4 培养基14
• 2.1.5 主要试剂14-17
• 2.1.6 主要仪器设备17
• 2.2 方法17-31
• 2.2.1 细菌的分离17
• 2.2.2 细菌的鉴定17-20
• 2.2.3 琼脂稀释法测最小抑菌浓度20-22
• 2.2.4 耐药基因的检测及鉴定22-24
• 2.2.5 PFGE分型24-28
• 2.2.6 多位点序列（MLST）分型28-30
• 2.2.7 葡萄球菌蛋白A（spa）分型30-31
• 3 结果与分析31-38
• 3.1 细菌分离鉴定结果31-32
• 3.1.1 初步分离与鉴定31
• 3.1.2 PCR鉴定31-32
• 3.2 受试菌对12种抗菌药的敏感性分析结果32-34
• 3.2.1 耐药率32-34
• 3.2.2 受试菌株的多重耐药情况34
• 3.3 耐药基因的PCR扩增及检测结果34
• 3.4 PFGE结果34-38
• 4 讨论38-44
• 4.1 葡萄球菌的分离鉴定38-39
• 4.2 葡萄球菌的耐药性监测39-41
• 4.3 cfr基因的流行分布41-43
• 4.4 cfr基因PFGE流行病学调查43-44
• 5 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-54
• 附录54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王冰;扈庆华;张锦周;黄薇;李迎慧;石晓路;林一曼;邱亚群;;深圳市食物中毒来源金黄色葡萄球菌的分子流行病学分析[J];中国热带医学;2015年02期

2 孟昭倩;孙永;李国兰;郭国侠;卜戈;张竹慧;;2010年-2013年阜阳市食源性金黄色葡萄球菌生物学及流行病学特征[J];中国卫生检验杂志;2014年08期

3 张扬;张兰荣;周景林;金岳;罗宇馨;高翔;迟复平;张靖;赵凤玲;王宝兰;;2009-2011年通州区食源性金黄色葡萄球菌的生物学及流行病学特征[J];中国微生态学杂志;2013年02期

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本文编号：1029236