屠宰前鸡猪源大肠杆菌耐药性和β-内酰胺酶基因调查研究

发布时间：2017-10-15 00:13

  本文关键词：屠宰前鸡猪源大肠杆菌耐药性和β-内酰胺酶基因调查研究

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【摘要】：大肠杆菌作为一个食品细菌污染指示菌和机体(环境)耐药性指示菌,在研究耐药性通过食物链方式在动物与人之间传递的作用及风险越来越引起大家的重视。屠宰前动物作为动物从饲养环节到餐桌中重要的一环,该过程如果控制不严格有可能将动物中的耐药大肠杆菌传递到人。革兰氏阴性菌对头孢菌素类药物最主要的耐药机制包括产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和Amp Cβ-内酰胺酶(Amp C)。本文主要通过检测屠宰猪鸡所携带大肠埃希菌的耐药性及其β-内酰胺酶基因流行情况,为控制耐药性通过食物链传递提供依据。采用麦康凯肠杆菌科选择性培养基分离、染色镜检和生化鉴定的方法对2013年~2015年采集自屠宰前的猪鸡样本进行大肠埃希菌分离鉴定,分离得到772株猪源和240株鸡源大肠埃希菌。采用琼脂稀释法测定1012株大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性。结果显示猪源菌株对亚胺培南耐药率为0%,对头孢他啶、阿米卡星、头孢噻肟和安普霉素的耐药率也较低,分别为1.2%、1.5%、5.7%和6.6%。耐药性最严重的为磺胺甲VA唑/甲氧苄啶和四环素两种药物,耐药率分别为87.9%和82.7%,其他耐药较为严重的还包括氨苄西林(79.8%)、多西环素(79.8%)、氯霉素(71.4%)、氟苯尼考(69.5%)和链霉素(65.3%)。除个别抗生素(氨苄西林、头孢喹肟和磺胺甲VA唑/甲氧苄啶)外,所有受试抗生素均从2013年到2015年之间表现出不同程度的耐药性上升,其中环丙沙星从2013年的17.9%上升到2015年的37.4%,多西环素从2014年的73.5%上升到2015年的90.5%。通过分析772株E.coli对受试抗生素耐药种类数,发现随着年代的推移,大肠埃希菌表现出对越来越多的抗生素产生耐药性。鸡源分离株MIC结果基本与猪源的相似,对头孢他啶(15.4%)和头孢噻肟(31.2%)的耐药率高于猪源,对黏菌素(4.6%)的耐药率低于猪源分离株(23.1%)。采用PCR检测和序列测定比对分析的方法对772株猪源菌株和240株鸡源菌株进行5种ESBLs和Amp C基因的检测和分析。PCR结果显示猪源大肠埃希菌bla~(CTX-M-9G)为主要的ESBLs型,检测率为2.7%,其次为bla~(CTX-M-1G),检测率为1.9%,bla~(CMY-2)检测率仅为0.3%。未检出到bla~(SHV)和bla~(DHA)。共有4种bla~( CTX-M)基因型,其中检出率最高的为bla~( CTX-M-55)(1.9%,16/772),其他依次为bla~( CTX-M-14)(1.7%,10/772)、bla~( CTX-M-65)(0.8%,5/772)和bla~( CTX-M-24)(0.2%,1/772)。鸡源大肠埃希菌中,bla~( CTX-M-55)检出率最高,为13.4%,其次为bla~(CTX-M-65)(5.8%,14/240)和bla~(CTX-M-14)(1.5%,4/240),还检测到bla~( CTX-M-15)(n=1)、bla~( CTX-M-24)(n=2)和bla~( CTX-M-121)(n=1)。通过对比携带β-内酰胺酶基因和不携带β-内酰胺酶基因的菌株对18种抗生素的耐药性,发现除多西环素和阿米卡星外,携带β-内酰胺酶基因的大肠埃希菌对抗菌药表现出更高的耐药率。综上所述,从屠宰前猪鸡分离的大肠埃希菌总体表现出很高的耐药水平,同时部分ESBL基因已在这些菌株中广泛流行。屠宰前动物携带的耐药菌和耐药基因存在通过食物链传播给人的风险,因此有必要加强该方面的调查以更好地控制耐药性传播。
【关键词】：大肠埃希菌 耐药性 ESBLs AmpC
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-16
• 1.1 大肠埃希菌耐药性现状11-12
• 1.2 ESBLs12-14
• 1.2.1 TEM型ESBLs12-13
• 1.2.2 OXA型ESBLs13
• 1.2.3 SHV型ESBLs13-14
• 1.2.4 CTX-M型ESBLs14
• 1.3 AmpC酶（pAmpC）的分类14
• 1.4 质粒介导的ESBLs、AmpC的流行状况14-16
• 1.5 本研究的目的意义16
• 2 材料与方法16-26
• 2.1 材料16-18
• 2.1.1 菌株来源16
• 2.1.2 质控菌16
• 2.1.3 药物16-17
• 2.1.4 培养基17
• 2.1.5 主要试剂17
• 2.1.6 主要仪器设备17-18
• 2.2 方法18-26
• 2.2.1 细菌的分离和鉴定18-19
• 2.2.2 琼脂稀释法检测药物敏感性19-21
• 2.2.3 β-内酰胺酶耐药基因的检测21-26
• 3 结果与分析26-38
• 3.1 细菌的分离鉴定26-27
• 3.2 药物敏感性试验结果27-34
• 3.3 ESBLs检测结果34-36
• 3.4 ESBLs基因的测序分析36-37
• 3.5 产ESBLs大肠埃希菌药敏结果37-38
• 4 讨论38-42
• 4.1 鸡猪源大肠埃希菌耐药情况38-39
• 4.2 鸡猪源大肠埃希菌ESBLs流行情况39-41
• 4.3 鸡猪源产ESBLs分离株的耐药情况41-42
• 5 全文小结42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-52

【参考文献】

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本文编号：1033974