禽和猪组织中哌嗪残留气相色谱—串联质谱确证分析方法的研究

发布时间：2017-10-16 19:05

  本文关键词：禽和猪组织中哌嗪残留气相色谱—串联质谱确证分析方法的研究

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【摘要】：哌嗪作为一种有效的驱虫药,在兽医临床上应用广泛。然而,不规范的使用造成动物源性食品中哌嗪残留严重,长期食用含有哌嗪的动物食品及其制品,会对人类健康造成威胁。目前,国内外动物组织中哌嗪残留检测相关研究较少。本研究以京海黄鸡、樱桃谷鸭、扬州鹅以及杜×长×大三元杂交猪为实验素材,综合利用柱前衍生、加速溶剂萃取和固相萃取等技术,建立禽和猪肌肉、肝脏、肾脏以及(皮肤+脂肪)组织中哌嗪残留气相色谱-串联质谱检测方法(GC-MS/MS),为动物源性食品中哌嗪残留检测标准的制定提供科学依据,为残留监控提供技术手段。本实验主要研究结果如下：1.建立和优化了乙酸酐法衍生哌嗪的实验条件,即20μg哌嗪标准品(完全溶于二氯甲烷溶剂)添加50μL乙酸酐和100μL三乙胺(添加量均过饱和),50℃密闭容器中反应30 min,衍生产物为哌嗪N,N-双取代产物1,4-二乙酰基哌嗪,并成功应用于气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)分析,改善了哌嗪的色谱特征,峰形尖锐,定量准确。2.建立和优化了采用加速溶剂萃取仪(ASE350)提取禽和猪组织中哌嗪残留的方法。乙腈作为提取溶剂,样品依次与无水硫酸钠、硅藻土研磨混匀装填入萃取池,80℃、1500psi条件下,在线去脂(正己烷做脱脂剂)与哌嗪萃取(乙腈作为萃取剂)连续进行。哌嗪在禽和猪组织中的添加水平分别为定量限(LOQ)水平、50.0、100.0、500.0、1000.0和2000.0 μg/kg浓度时,各组织样品平均回收率均在80.98%-96.26%之间,相对标准偏差均在1.58%-4.53%之间。该提取方法溶剂用量少,样品基质影响小,萃取效率高,回收率高,且安全、快速、全自动。3.首次建立和优化了禽和猪肌肉、肝脏、肾脏以及(皮肤+脂肪)组织中哌嗪残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)确证检测方法。采用EI模式,SCAN和SIM扫描定性,Auto SRM结合外标法定量；在各组织中添加哌嗪4.5～2500.0μg/kg浓度范围内,定量离子对m/z170.168.1的色谱峰面积与其浓度线性关系良好,决定系数R2=0.9995；各组织精密度测定结果：日内相对标准偏差均在1.15%-5.92%之间,日间相对标准偏差均在2.03%-8.10%之间。在优化的实验条件下,哌嗪在禽和猪组织中的检测限(LOD)在1.4～1.6Hg/kg (S/N≥3),定量限(LOQ)在4.8～5.2μg/kg (S/N≥10)。方法验证参数均满足中国农业部、欧盟和美国FDA兽药残留检测的要求,定量准确、快速、灵敏度高。
【关键词】：动物可食性组织 哌嗪 气相色谱-串联质谱法 残留 确证分析
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.84
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符号说明10-11
• 第一章 文献综述11-21
• 1 哌嗪的物理化学性质11-12
• 2 哌嗪的合成工艺及用途12-13
• 2.1 哌嗪的合成工艺12
• 2.2 哌嗪及其衍生物的应用12-13
• 2.2.1 哌嗪及其衍生物在医药领域的应用12-13
• 2.2.2 哌嗪及其衍生物在其他领域的应用13
• 3. 哌嗪及其衍生物的药理学、毒理学研究13-14
• 3.1 作用机理13
• 3.2 毒理学研究及不良反应13-14
• 4 哌嗪检测方法的研究14-15
• 4.1 重量分析法14
• 4.2 比色法14
• 4.3 离子色谱法14
• 4.4 分光光度法14
• 4.5 气相色谱法14-15
• 4.6 液相色谱法15
• 5 GC-MS与GC-MS/MS概述15-17
• 5.1 GC-MS技术简介15-16
• 5.2 GC-MS的基本结构和工作原理16
• 5.3 GC-MS/MS技术16
• 5.4 GC-MS/MS定量方法的建立16-17
• 6 样品的前处理方法17-20
• 6.1 加速溶剂萃取技术17-18
• 6.1.1 加速溶剂萃取技术的原理17
• 6.1.2 加速溶剂萃取的一般流程17-18
• 6.1.3 加速溶剂萃取的优势18
• 6.2 离心浓缩技术18-19
• 6.2.1 离心浓缩技术的原理18
• 6.2.2 离心浓缩仪系统的组成18
• 6.2.3 离心浓缩仪的应用18-19
• 6.3 衍生化原理及检测方法19-20
• 6.3.1 目标物衍生化的意义19
• 6.3.2 衍生化反应方式19-20
• 7 研究目的和意义20-21
• 7.1 研究目的20
• 7.2 研究意义20-21
• 第二章 禽和猪组织中哌嗪残留气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)确证分析方法的研究21-68
• 1 材料与方法21-27
• 1.1 标准品、主要试剂与材料21-22
• 1.2 主要溶液配制22
• 1.2.1 标准品溶液22
• 1.2.2 氨水甲醇溶液22
• 1.2.3 盐酸水溶液22
• 1.2.4 盐酸甲醇溶液22
• 1.3 主要仪器22-23
• 1.4 试验方法23-27
• 1.4.1 气相色谱条件23
• 1.4.2 质谱条件23
• 1.4.3 供试动物的饲养与样品采集23
• 1.4.4 样品的提取与净化23-25
• 1.4.5 样品的衍生化25
• 1.4.6 标准曲线的绘制25
• 1.4.7 样品回收率的测定25
• 1.4.8 样品精密度的测定25-26
• 1.4.9 检测限与定量限的测定26
• 1.4.10 确定限与检测容量26
• 1.4.11 基质效应26-27
• 2 结果与分析27-58
• 2.1 母离子与子离子的确定27-30
• 2.2 标准曲线和线性范围30
• 2.3 添加回收率和精密度30-55
• 2.3.1 鸡组织中哌嗪的添加回收率和精密度30-36
• 2.3.2 鸭组织中哌嗪的添加回收率和精密度36-42
• 2.3.3 鹅组织中哌嗪的添加回收率和精密度42-48
• 2.3.4 猪组织中哌嗪的添加回收率和精密度48-55
• 2.4 检测限与定量限55
• 2.5 确定限与检测容量55-57
• 2.6 基质效应的评估57-58
• 3 讨论58-68
• 3.1 检测方法的选择与评价58
• 3.2 毛细管色谱柱的选择58-59
• 3.3 溶剂的选择59-60
• 3.4 样品的提取与净化60-63
• 3.4.1 萃取溶剂的选择60
• 3.4.2 萃取温度的优化60
• 3.4.3 冲洗溶剂体积的优化60-61
• 3.4.4 不同提取方法和提取溶剂的比较61-63
• 3.5 样品的衍生化反应与产物稳定性63-67
• 3.5.1 衍生化试剂的选择63
• 3.5.2 待优化条件的确定63-64
• 3.5.3 衍生反应温度的优化64
• 3.5.4 衍生反应时间的优化64-65
• 3.5.5 反应试剂用量的优化65-66
• 3.5.6 衍生产物的稳定性66-67
• 3.6 GC-MS/MS参数的优化67-68
• 3.6.1 气相参数的优化67
• 3.6.2 质谱参数的优化67
• 3.6.3 色谱分析的重复性67-68
• 全文结论68-69
• 参考文献69-76
• 致谢76-77
• 攻读硕士学位期间发表论文77-78

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本文编号：1044363