牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及其部分gB蛋白的原核表达

发布时间：2017-10-17 08:25

  本文关键词：牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及其部分gB蛋白的原核表达

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【摘要】：牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛疱疹病毒I型(BHV-1)引起的一种急性、热性、接触性传染病。此病在全球范围内广泛分布,主要损害牛的呼吸系统及生殖系统,给养牛业带来巨大损失,其所具有的潜伏感染性更使得本病防控难度大而难以根除。BHV-1编码的糖蛋白gB具有高度的保守性,在病毒吸附、侵入及感染细胞过程中发挥重要作用,是病毒复制所必需的结构蛋白。该蛋白能够诱导宿主体液及细胞免疫应答,是进行IBRV检测的首选特异性抗原之一。基于此,本文进行了以下三方面的研究：1牛传染性鼻气管炎的血清学和病原学检测为探究IBR在宁夏地区存在繁殖障碍的奶牛群中的流行情况,本研究针对宁夏地区的18个奶牛群中出现繁殖障碍的奶牛进行血清的采集,共计470份,利用酶联免疫吸附试验进行IBR的血清学检测；同时采集疑似IBR感染而死亡的组织病料,共计16份,利用PCR技术进行IBRV的检测。结果显示：所采集血清中存在338份IBR抗体阳性血清,平均阳性率为71.9%：而疑似病料中存在7份IBRV阳性病料。此结果表明牛传染性鼻气管炎已在宁夏地区奶牛群中开始流行。2牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定将经PCR检测鉴定为IBRV阳性的组织脏器反复冻融处理几次之后,取上清接种到MDBK细胞上进行病毒的分离培养。结果从一份疑似IBR感染的犊牛肺脏中分离到了一株病毒,出现了明显的细胞病变,通过病毒中和试验、PCR方法及核酸测序鉴定后,证实在宁夏地区成功分离到了牛传染性鼻气管炎病毒,并将其命名为IBRVYF_15株。3 IBRV部分gB蛋白的原核表达对gB蛋白进行抗原性分析,在其胞外区选出一有效片段,并设计合成其特异性引物,以提取的分离株IBRVYF_15的病毒基因组为模板扩增出目的片段gBV。得到目的基因后将其插入表达载体pET32a中构成重组质粒,再转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定及Western-blotting分析,得到了预期所需且高效表达的重组蛋白,并且重组蛋白能够与IBR阳性血清发生特异性反应。本研究成功克隆得到了的gB胞外区的基因片段,并通过大肠杆菌进行高效表达,得到能够作为诊断IBRV的有效特异性抗原,为进一步研究gB蛋白的功能特性以及建立有效的牛传染性鼻气管炎ELISA诊断方法奠定了基础。
【关键词】：牛传染性鼻气管炎 血清学检测 病毒分离 gB蛋白 原核表达
【学位授予单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 英文缩略词表10-11
• 第一部分 文献综述11-21
• 1 牛传染性鼻气管炎的发展历史及国内外流行情况11-12
• 2 牛传染性鼻气管炎病毒的研究进展12-14
• 2.1 IBRV的分类地位及血清型12-13
• 2.2 IBRV的病毒形态及培养13
• 2.3 IBRV的分子生物学特性13-14
• 2.4 IBRV所编码的糖蛋白gB的研究概述14
• 3 牛传染性鼻气管炎的流行病学与症状14-16
• 3.1 牛传染性鼻气管炎的流行病学14-15
• 3.2 牛传染性鼻气管炎的症状15-16
• 4 牛传染性鼻气管炎的诊断与防制16-20
• 4.1 牛传染性鼻气管炎的诊断16-19
• 4.2 牛传染性鼻气管炎的防制19-20
• 5 研究目的与意义20-21
• 第二部分 试验内容21-50
• 第一章 牛传染性鼻气管炎的血清学和病原学检测21-27
• 1.1 材料21-22
• 1.2 方法22-24
• 1.3 结果24-25
• 1.4 讨论25-27
• 第二章 牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定27-34
• 2.1 材料27-28
• 2.2 方法28-30
• 2.3 结果30-32
• 2.4 讨论32-34
• 第三章 IBRV部分gB蛋白的原核表达34-49
• 3.1 材料34-37
• 3.2 方法37-43
• 3.3 结果43-47
• 3.4 讨论47-49
• 第四章 结论49-50
• 参考文献50-55
• 附录55-57
• 致谢57-58
• 个人简介58

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