四川部分地区副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌血清流行病学调查及其二联蜂胶灭活苗的初步研制

发布时间：2017-10-20 15:36

  本文关键词：四川部分地区副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌血清流行病学调查及其二联蜂胶灭活苗的初步研制

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【摘要】：本试验通过采集四川各地存在呼吸道症状的保育猪的血清(未注射副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌疫苗),旨在对近年来严重影响我国养猪业发展的副猪嗜血杆菌病与猪2型链球菌病的血清流行病学情况进行调查,为预防和控制副猪嗜血杆菌(Hps)病与猪2型链球菌病提供一定的流行病学依据。将筛选出的副猪嗜血杆菌5型(Hps 5型)与猪2型链球菌(Ss2)疫苗菌株制备成二联蜂胶灭活苗,并进行免疫抗体及免疫保护力评价实验。结果如下：1.副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌血清流行病学调查本试验采用ELISA检测试剂盒对2015年2月至2016年1月从四川多地采集的180份保育猪血清进行抗体检测。其中,Hps抗体阳性率为55.6%(100/180)；西昌、绵阳、成都、眉山等地感染率较高,分别为85.7%(6/7)、83.0%(44/53)、77.8%(14/18)、66.7%(4/6)。Ss2血清抗体阳性率为29.4%(53/180)；阿坝、雅安、宜宾等地感染率较高,分别为54.2%(13/24)、50%(4/8)、48.7%(19/39)；Hps与Ss2混合感染百分率为17.2%(31/180)。表明四川地区Hps与Ss2混合感染情况较为明显。2.疫苗株的筛选通过对11株Hps 5型菌株进行毒力及免疫原性比较试验,确定疫苗菌株为82号,编号Hps82；通过对17株Ss2进行毒力及免疫原性比较试验,确定疫苗菌株为PZ903,编号Ss903。3.Hps与Ss2二联蜂胶灭活苗的初步研制灭活疫苗株Hps82与Ss903菌株的最佳甲醛灭活浓度确定为0.1%,灭活时间均为24 h。制备的Hps 5型与Ss2二联蜂胶灭活苗中Hps82含菌量为4.0×109CFU/ml,Ss903含菌量为2.0×109 CFU/ml。制备的灭活苗经皮下免疫试验小鼠两次(一免后一周二免),在小鼠上能产生良好的免疫保护力,同时能在4℃至少保存3个月。4.二联蜂胶灭活苗与市售疫苗的对比试验将制备的Hps5型与Ss2二联蜂胶灭活苗与市售Hps灭活疫苗(中牧生物科技有限公司)和市售Ss2灭活疫苗(广东永顺生物制药股份有限公司)分别免疫小鼠进行比较,结果显示：制备的二联蜂胶灭活苗在小鼠上的保护效果与市售Hps疫苗和Ss2疫苗基本相当,且本试验制备的Hps与Ss2二联蜂胶灭活苗可以减少免疫次数带来的应激反应。
【关键词】：副猪嗜血杆菌 猪2型链球菌 血清 二联蜂胶灭活苗
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 文献综述12-19
• 1 Hps病研究现状12-13
• 1.1 病原学12
• 1.2 流行病学12-13
• 1.3 临床症状与病理变化13
• 2 链球菌的研究现状13-15
• 2.1 病原学13-14
• 2.2 流行病学14-15
• 2.3 临床症状及病理变化15
• 3 蜂胶佐剂研究现状15-17
• 4 疫苗候选株血清型的选择17
• 5 研究目标与意义17-19
• 第二章 四川部分地区副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌血清流行病学调查19-27
• 1 材料19
• 1.1 血清来源19
• 1.2 试剂19
• 1.3 设备19
• 2 方法19-21
• 2.1 血清样品采集19
• 2.2 ELISA操作步骤19-21
• 2.2.1 Hps ELISA检测方法20
• 2.2.2 Ss2 ELISA检测方法20-21
• 3 结果21-25
• 3.1 四川部分地区Hps病血清流行病学调查结果21-22
• 3.2 不同季节Hps抗体检测结果22-23
• 3.3 四川部分地区Ss2病血清流行病学调查结果23
• 3.4 不同季节Ss2抗体检测结果23-24
• 3.5 Hps与Ss2混合感染抗体检测结果24-25
• 4 讨论25-26
• 5 小结26-27
• 第三章 副猪嗜血杆菌与猪2型链球菌疫苗菌株的筛选27-39
• 1 材料27-30
• 1.1 菌株来源27
• 1.2 实验仪器27-28
• 1.3 试验试剂28
• 1.4 实验动物28-29
• 1.5 PCR引物及扩增条件29
• 1.6 主要培养基和溶液的配置29-30
• 2 方法30-32
• 2.1 疫苗菌株的筛选30
• 2.1.1 Hps 5型疫苗株的筛选30
• 2.1.2 Ss2疫苗株的筛选30
• 2.2 疫苗株生长曲线的测定30-31
• 2.2.1 Hps疫苗菌株生长曲线测定30-31
• 2.2.2 Ss2疫苗菌株生长曲线测定31
• 2.3 疫苗菌株平板计数31-32
• 2.3.1 Hps疫苗菌株平板菌落计数31
• 2.3.2 Ss2疫苗菌株平板菌落计数31-32
• 2.4 攻毒菌株LD_(50)测定32
• 2.4.1 Hps攻毒菌株LD_(50)测定32
• 2.4.2 Ss2攻毒菌株LD_(50)测定32
• 3 结果32-37
• 3.1 Hps 5型疫苗株的筛选结果32-33
• 3.2 Ss2疫苗菌株的筛选结果33-34
• 3.3 疫苗菌株Hps82菌株生长曲线测定结果34-35
• 3.4 疫苗菌株Hps82菌株平板菌落计数结果35
• 3.5 攻毒菌株Hps40 LD_(50)测定结果35-36
• 3.6 Ss903疫苗菌株生长曲线测定结果36
• 3.7 疫苗菌株Ss903菌株平板菌落计数结果36-37
• 3.8 Ss101菌株LD_(50)测定结果37
• 4 讨论37-38
• 5 小结38-39
• 第四章 副猪嗜血杆菌与猪2型二联蜂胶灭活苗的初步研制39-50
• 1 材料39-40
• 1.1 试验菌株39
• 1.2 试验动物及试剂盒39
• 1.3 疫苗来源39
• 1.4 主要药品及配制方法39-40
• 1.5 试验所需的仪器40
• 2 方法40-44
• 2.1 二联蜂胶灭活苗的制备40-41
• 2.1.1 细菌的培养40-41
• 2.1.2 细菌灭活条件的选择41
• 2.1.3 灭活菌液制备41
• 2.1.4 蜂胶佐剂的制备和干物质含量测定41
• 2.1.5 二联疫苗的合成41
• 2.2 二联蜂胶灭活疫苗性能检测41-43
• 2.2.1 无菌试验41-42
• 2.2.2 最佳免疫途径试验42
• 2.2.3 二联蜂胶灭活苗免疫次数优化42
• 2.2.4 二联蜂胶灭活苗保护效力测定42
• 2.2.5 二联蜂胶灭活苗保护时间测定42-43
• 2.2.6 二联蜂胶灭活苗保存时间试验43
• 2.3 二联蜂胶灭活苗与市售Hps与Ss疫苗的对比43-44
• 3 结果44-49
• 3.1 疫苗株Hps82与Ss903的甲醛灭活条件的选择结果44
• 3.2 蜂胶干物质含量的测定结果44
• 3.3 无菌试验结果44
• 3.4 最佳免疫途径试验结果44-45
• 3.5 二联蜂胶灭活苗的免疫次数优化结果45
• 3.6 二联蜂胶灭活苗免疫保护试验结果45-46
• 3.7 二联蜂胶灭活苗保护时间试验结果46
• 3.8 二联蜂胶灭活苗保存时间试验结果46-47
• 3.9 二联蜂胶灭活苗与市售Hps与Ss2疫苗的对比试验结果47-49
• 4 讨论49
• 4.1 免疫途径及免疫次数试验49
• 4.2 二联蜂胶灭活苗与市售疫苗的对比49
• 5 小结49-50
• 第五章 结论50-51
• 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 附录57-62

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