一株少孢节丛孢菌的分离鉴定及捕食效率研究

发布时间：2017-10-27 06:11

  本文关键词：一株少孢节丛孢菌的分离鉴定及捕食效率研究

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【摘要】：为了解少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的生物学特点和捕食能力,本试验由青海省祁连地区采集土壤样品,采用玉米粉琼脂(CMA)培养基分离了一株捕食线虫性真菌,根据菌丝、分生孢子的形态特点以及捕获虫体的方式初步判定为少孢节丛孢菌。对分离菌株的ITS2基因进行了PCR扩增、序列测序、系统进化树分析和同源性比对,结果发现本试验分离的菌株与Gene Bank数据库上公布的少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)ATCC株和少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)XAo1株在同一个分支上并且三个菌株之间的同源性达到了100%,表明本试验分离菌株确实为少孢节丛孢菌,暂定名为少孢节丛孢菌QHQL株。形态学特点研究结果显示少孢节丛孢菌末梢菌丝界限分明,中间菌丝错乱无规则,单个分生孢子呈倒卵形,多个分生孢子花瓣样排列生长,扫描电镜观察发现菌丝、分生孢子、以及分生孢子梗上均有明显的隔,透射电镜观察发现隔的形成是由于细胞膜在特定的位置向内弯曲生长而形成的;物理化学特点研究结果显示革兰氏染色呈阴性,最适生长温度为21℃,最适生长p H为6;捕食特性研究发现少孢节丛孢菌经线虫虫体诱导后产生捕食器官,虫体被捕获后在48 h以内被消耗殆尽。以玉米粉琼脂(CMA)作为培养基的捕食效率试验和以羊粪便作为培养基的捕食效率试验结果分别为86.21%和73.91%。
【关键词】：少孢节丛孢菌 分离 鉴定 捕食效率
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 文献综述9-14
• 1.1 前言9-10
• 1.2 捕食线虫性真菌的研究进展10-12
• 1.3 少孢节丛孢菌的研究进展12-14
• 第2章 少孢节丛孢菌的分离纯化和ITS2基因的PCR扩增及分析14-26
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 试剂14
• 2.1.2 仪器14
• 2.1.3 样品14-15
• 2.2 方法15-19
• 2.2.1 0.4 G/L玉米粉琼脂（CMA）培养基的制备15
• 2.2.2 土壤线虫的培养15
• 2.2.3 少孢节丛孢菌的分离培养15
• 2.2.4 少孢节丛孢菌的纯化15
• 2.2.5 少孢节丛孢菌基因组DNA的提取15-16
• 2.2.6 ITS2基因引物的设计16-17
• 2.2.7 ITS2基因的PCR扩增17
• 2.2.8 基因组DNA与ITS2基因PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳17-18
• 2.2.9 ITS2基因PCR扩增产物的转化试验及测序18-19
• 2.3 结果19-24
• 2.3.1 少孢节丛孢菌的分离及纯化19-20
• 2.3.2 基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳结果20-21
• 2.3.3 ITS2基因PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果21-22
• 2.3.4 ITS2基因PCR扩增产物的测序结果22
• 2.3.5 对ITS2基因测序结果的分析22-24
• 2.4 讨论24-26
• 第3章 少孢节丛孢菌生物学特点研究26-37
• 3.1 材料26
• 3.1.1 试剂26
• 3.1.2 仪器26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 少孢节丛孢菌形态学特点研究26-27
• 3.2.1.1 样品的制备及显微成像系统观察26
• 3.2.1.2 扫描电镜样品制备及观察26-27
• 3.2.1.3 透射电镜样品的制备及观察27
• 3.2.2 少孢节丛孢菌物理化学特点研究27-28
• 3.2.2.1 少孢节丛孢菌的革兰氏染色27
• 3.2.2.2 少孢节丛孢菌最适生长温度的测定27-28
• 3.2.2.3 少孢节丛孢菌最适生长pH的测定28
• 3.2.2.4 少孢节丛孢菌厌氧培养28
• 3.2.3 少孢节丛孢菌捕食特点研究28
• 3.3 结果28-34
• 3.3.1 少孢节丛孢菌形态学特点研究28-31
• 3.3.1.1 显微成像观察28-29
• 3.3.1.2 扫描电镜观察29-30
• 3.3.1.3 透射电镜观察30-31
• 3.3.2 少孢节丛孢菌物理化学特点研究31-33
• 3.3.2.1 少孢节丛孢菌革兰氏染色31-32
• 3.3.2.2 最适生长温度测定结果32-33
• 3.3.2.3 最适生长pH的测定结果33
• 3.3.2.4 厌氧培养结果33
• 3.3.3 少孢节丛孢菌的捕食特性研究33-34
• 3.4 讨论34-37
• 第4章 少孢节丛孢菌捕食效率研究37-42
• 4.1 材料37
• 4.1.1 试剂37
• 4.1.2 粪便样品及线虫来源37
• 4.2 方法37-38
• 4.2.1 少孢节丛孢菌分生孢子制剂的制作37
• 4.2.2 羊真胃线虫三期幼虫的孵化培养37-38
• 4.2.3 以玉米粉琼脂作为培养基的捕食效率试验38
• 4.2.4 以粪便作为培养基的捕食效率试验38
• 4.3 结果38-40
• 4.3.1 羊真胃线虫三期幼虫的孵化培养38-39
• 4.3.2 以玉米粉琼脂（CMA）作为培养基的捕食效率试验39-40
• 4.3.3 以粪便作为培养基的捕食效率试验40
• 4.4 讨论40-42
• 结论42-43
• 展望43-44
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

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本文编号：1102238