板蓝根颗粒及黄芪多糖粉调节动物免疫力和降低猪血液中PRRS残留毒核酸载量的研究

发布时间：2017-10-29 15:34

  本文关键词：板蓝根颗粒及黄芪多糖粉调节动物免疫力和降低猪血液中PRRS残留毒核酸载量的研究

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【摘要】：猪蓝耳病即猪繁殖与呼吸综合征(pocrin reoductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪蓝耳病毒引起的一种以妊娠母猪流产、各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍和大量死亡为特征的高度传染性疾病。PRRSV会在猪肺泡巨噬细胞(PAM)中大量复制,导致机体发生免疫调节紊乱,引起其他疾病的继发感染。目前我国主要通过疫苗免疫来预防PRRS,蓝耳疫苗现市面上主要有两种,一种为PRRS灭活苗；一种为PRRS弱毒苗(经典毒株或高致病性毒株)。弱毒苗免疫效果较好,所以运用较为广泛,但弱毒苗本身存在散毒危险,会在猪体内存在残留毒。因此寻求一种既能够使用免疫效果较好的蓝耳弱毒苗又能一定程度上减轻甚至净化蓝耳弱毒苗在猪体内的残留毒的方法尤为重要。1黄芪多糖粉和板蓝根颗粒对小鼠巨噬细胞吞噬功能的研究。目的：研究不同剂量的板蓝根颗粒、黄芪多糖粉对小鼠免疫功能中的巨噬细胞吞噬功能的影响。方法：选取27只小鼠随机分为9组,每组3只小鼠。第1-8组的小鼠分别腹腔注射4种不同浓度的板蓝根颗粒、黄芪多糖粉溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续4d,第8天腹腔注射可溶性淀粉,产生异源性吞噬,诱导产生巨噬细胞,第10d注入5%鸡红细胞1ml,让小鼠自由活动30min后处死小鼠吸取腹腔液于载玻片上,37℃温箱中孵育后瑞式染色镜检,测定腹腔巨噬细胞吞噬功能的变化。结果：两种药物均能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能；板蓝根颗粒在20mg/ml、黄芪多糖粉在30mg/ml对小鼠的效果最好,与对照组差异极显著(P0.01)。2荧光定量RT-PCR检测PRRSV核酸残留毒方法建立本试验通过对比分析PRRSV ORF7基因序列,在其保守区设计1对引物来人工合成靶基因,经过扩增得到的靶基因长度为162bp,条带清晰,扩增效果达到预期。将靶基因纯化回收,通过连接转化,制备重组质粒pMD19-T-PRRSV,利用PCR方法进行初步鉴定,在确定靶基因成功转入DH5α后再进行测序鉴定,而测序结果与NCBI上登录的PRRSV ORF7基因的同源性达100%,说明成功克隆了靶基因,同时将制备的重组质粒抽提后测定其浓度作为荧光定量RT-PCR扩增的模板。根据靶基因序列设计简并引物进行荧光定量PCR扩增。同时通过优化简并引物浓度和退火温度确定该方法的最佳反应条件,成功建立了关于PRRSV的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,简并引物的设计更便于不同地区之间毒株的鉴定。经过特异性、灵敏性以及重复性试验,该方法可以特异性的检测到pMD19-T-PRRSV,可检测到的阳性质粒模板的最低拷贝数为1.66×101 copies,阳性质粒模板在组内的变异系数均小于2%,表明该方法的特异性好,灵敏度高。为后期药物试验监控猪血液中PRRSV核酸载量变化量奠定了基础。3黄芪多糖粉和板蓝根颗粒降低母猪血液中PRRSV残留毒(或疫苗毒)的研究目的：通过黄芪多糖粉和板蓝根颗粒的饲喂,检测带毒母猪血液中PRRSV残留毒(或疫苗毒)的变化,初步揭示黄芪多糖粉和板蓝根颗粒降低猪血液中PRRS残留毒(或疫苗毒)的能力,为生产实际上保证猪群健康提供参考和帮助,以利于黄芪多糖粉和板蓝根颗粒类中草药添加剂的开发和应用。方法：选取21头经检测带有PRRS残留毒(或疫苗毒)的后备母猪,随机分为3组,并于每组中各加入3头不带毒的健康母猪,即对照组、试验1组、试验2组。对照组饲喂普通饲料,试验1组使用黄芪多糖粉拌料饲喂,试验2组使用板蓝根颗粒拌料饲喂。3个组试验母猪分开饲喂,饲喂周期为两个月,每十天进行一次采血通过建立的荧光定量RT-PCR技术检测各组母猪血液中PRRS残留毒(或疫苗毒)核酸载量。结果表明：两种药物均能在一定程度上保护健康母猪免受PRRSV感染。而对于已经带毒的母猪,板蓝根颗粒能有效的降低其血液中PRRSV核酸的载量,帮助母猪净化血液中的PRRSV残留毒,降低母猪的淘汰率和返情率,而黄芪多糖粉的这一效果并不明显。
【关键词】：PRRS残留毒 巨噬细胞 黄芪多糖粉 板蓝根颗粒 荧光定量RT-PCR
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略词表9-13
• 第一章 文献综述13-22
• 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展13-18
• 1.1 PRRSV流行病学概述13-14
• 1.2 PRRSV病原检测方法14-18
• 2 黄芪多糖粉的研究进展18-19
• 2.1 黄芪多糖粉的组成18
• 2.2 黄芪多糖粉的免疫功效18-19
• 3 板蓝根颗粒的研究进展19-22
• 3.1 板蓝根颗粒的组成20
• 3.2 板蓝根颗粒的免疫增强功效20
• 3.3 板蓝根颗粒抗菌消炎作用20
• 3.4 板蓝根颗粒的抗病毒功效20-21
• 3.5 板蓝根颗粒抗肿瘤作用21-22
• 第二章 黄芪多糖粉及板蓝根颗粒调节小鼠巨噬细胞吞噬功能的研究22-28
• 1 材料与方法22-24
• 1.1 植物多糖22
• 1.2 主要试剂及配制22
• 1.3 动物及分组处理22-23
• 1.4 腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定23
• 1.5 试验数据的统计分析23-24
• 2 结果24-26
• 3 讨论26-28
• 第三章 荧光定量RT-PCR检测PRRSV核酸残留毒方法建立28-43
• 1 主要试剂与仪器28-29
• 1.1 主要仪器28
• 1.2 主要试剂28-29
• 2 实验方法29-33
• 2.1 重组质粒PMD-ORF_7的制备与鉴定29-32
• 2.2 荧光定量RT-PCR的条件优化32-33
• 3 结果33-40
• 3.1 重组质粒PMD-ORF7的鉴定与浓度测定33-34
• 3.2 荧光定量RT-PCR条件优化34-35
• 3.3 ORF7-Power SYBR Green RT-PCR敏感性检测结果35-36
• 3.4 ORF7-Power SYBR Green RT-PCR标准曲线生成36-38
• 3.5 ORF7-Power SYBR Green RT-PCR特异性检测结果38-39
• 3.6 ORF7-Power SYBR Green RT-PCR重复性检测结果39-40
• 4 讨论40-43
• 第四章 板蓝根颗粒及黄芪多糖粉降低猪血液中PRRSV核酸载量的研究43-57
• 1 材料43
• 1.1 试验动物43
• 1.2 试验药物43
• 1.3 主要试剂及配置43
• 1.4 主要仪器设备43
• 2 实验方法43-45
• 2.1 筛选带毒猪43-44
• 2.2 实验分组及药物投喂44-45
• 2.3 荧光定量PCR检测血液病毒载量变化过程45
• 3 结果45-55
• 3.1 带毒母猪筛选结果45-47
• 3.2 实验分组结果47-48
• 3.3 血液病毒核酸载量变化结果48-54
• 3.4 各组母猪发情率及淘汰率的比较54-55
• 4 讨论55-57
• 参考文献57-62
• 致谢62-63
• 作者简介及其攻读硕士学位期间学术论文发表情况63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周孟清;张慧茹;贾峰;赵银丽;黄进;齐仁立;罗宇;;黄芪和板蓝根多糖的抗菌抗病毒作用研究[J];饲料工业;2014年21期

2 颜爱;李波;李润成;喻凯;余兴龙;;香菇多糖和黄芪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能调节的研究[J];中国免疫学杂志;2012年11期

3 陈凯;窦月;陈智;田景振;;板蓝根抗病毒与抗内毒素等清热解毒药效作用及化学基础研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2011年18期

4 刘明研;;黄芪多糖对犬免疫指标的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2011年13期

5 刘俊玲;张元元;崔保安;张红英;王学兵;;板蓝根多糖对体外培养鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响[J];中国农学通报;2011年11期

6 史亚丽;蔡德华;高兴喜;;灵芝多糖对长期大强度运动小鼠巨噬细胞活性及功能的影响[J];中国运动医学杂志;2011年04期

7 邱妍;董发明;胡元亮;王德云;李翔;;黄芪多糖对新支二联疫苗免疫雏鸡的免疫调节作用[J];中国预防兽医学报;2011年03期

8 张守栋;李明;吕英然;张W，

本文编号：1113623