牛副流感病毒3型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

发布时间：2017-11-07 17:26

  本文关键词：牛副流感病毒3型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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【摘要】：本试验为建立一种特异性强、敏感性高的检测牛副流感病毒3型(BPIV3)的实时荧光RT-PCR方法。本试验根据GenBank上发表的牛副流感病毒3型基因序列,进行对比分析,设计合成了能特异性扩增BPIV3的1对引物及1条探针。制备标准阳性质粒DNA模板,对实时荧光定量RT-PCR反应参数和反应条件进行优化,并制备实时荧光RT-PCR标准曲线,评价所建立的实时荧光定量RT-PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性,并依赖本试验建立的BPIV3实时荧光定量RT-PCR方法对11份临床样品进行检测。结果表明,在引物浓度400nmol/L、探针浓度300nmol/L、退火温度58℃时所建立的本实时荧光定量RT-PCR方法达到最佳效果。本方法可以特异的检测BPIV3,并能与巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒、牛支原体、小反刍兽疫病毒、链球菌、绵羊痘病毒、山羊痘病毒、羊口疮病毒相区分。另外,本试验建立的方法Ct值的变异系数均小于1%,BPIV3的最小检出量为1.00×102 copies/μL。表明所建立的实时荧光RT-PCR方法具有较强的稳定性、较高的敏感性。运用所建立的实时荧光RT-PCR方法检测临床样品,可以快速检测BPIV3。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.653

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本文编号：1153413