一种新型鸭呼肠孤病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR方法的建立

发布时间：2017-11-10 12:27

  本文关键词：一种新型鸭呼肠孤病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR方法的建立

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【摘要】：该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板,根据Gen Bank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列,设计合成了一对特异性引物,PCR扩增基因片段,将其克隆至p ET-30a载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符,所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101~108 copies/u L之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。
【作者单位】： 中国农业科学院上海兽医研究所;甘肃农业大学动物医学院;
【基金】：上海市科委创新项目(13391901600) 国家自然科学基金项目(31270194)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： DETECTION OF NOVEL DUCK REOVIRUS USING SYBR GREEN IIFLUORESCENT QUANTITATIVE PCR ASSAYDING Ming-yang1,2,QI Wei-qiang1,2,CHEN Zong-yan1,ZHU Jie1,WU Qiao-mei1,MIAO Qiu-hong1,LI Chuan-feng1,WU Run1,LIU guang-qing1(1.Shanghai Veterinary Research Institute,CA

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 胡奇林,陈少莺,林锋强,程晓霞,林天龙,江斌,陈仕龙,程由铨,李怡英,朱小丽;番鸭呼肠孤病毒的鉴定[J];病毒学报;2004年03期

2 陈宗艳;朱英奇;王世传;李传峰;李露;王玢缤;付玉志;高景鹏;王超;刘光清;;一株新型鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[J];中国动物传染病学报;2012年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈少莺;陈仕龙;林锋强;王劭;江斌;程晓霞;朱小丽;李兆龙;;新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J];病毒学报;2012年03期

2 周丽;温纳相;宋永峰;周全;鲁俊鹏;;番鸭呼肠孤病毒感染雏番鸭的病理学观察[J];山东畜牧兽医;2012年04期

3 卢玉葵,马春全,张济培,吴悦霞;番鸭呼肠病毒病[J];动物医学进展;2005年10期

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6 林锋强;胡奇林;陈仕龙;欧阳岁东;程晓霞;王劭;朱小丽;;应用RT-PCR检测人工感染番鸭体内番鸭呼肠病毒的动态分布[J];动物医学进展;2007年03期

7 林锋强;陈仕龙;胡奇林;王劭;程晓霞;朱小丽;陈少莺;;番鸭呼肠病毒病的诊断与预防[J];动物医学进展;2007年05期

8 林锋强;朱小丽;胡奇林;欧阳岁东;程晓霞;陈仕龙;王劭;陈少莺;;番鸭呼肠孤病毒M3基因克隆及序列分析[J];福建畜牧兽医;2008年S1期

9 苏镜林;;警惕鸭呼肠孤病毒病[J];福建畜牧兽医;2010年01期

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中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 曾智勇;猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及全基因组cDNA文库的构建和分子遗传特征分析[D];四川农业大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

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2 朱英奇;新型鸭呼肠孤病毒的鉴定及其全基因组序列解析[D];安徽农业大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 胡奇林,陈少莺,林锋强,程晓霞,林天龙,江斌,陈仕龙,程由铨,李怡英,朱小丽;番鸭呼肠孤病毒的鉴定[J];病毒学报;2004年03期

2 胡奇林,陈少莺,江斌,程晓霞,林天龙,李怡英,程由铨;一种新的番鸭疫病(暂名番鸭肝白点病)病原的发现[J];福建畜牧兽医;2000年06期

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4 黄庚明,张毓金,黄承锋,黄忠,吕殿红,廖丽春;番鸭新疫病——花肝病及其病原的初步研究[J];广东畜牧兽医科技;2001年01期

5 肖履中;应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒[J];青海畜牧兽医杂志;2000年02期

6 刘思伽,凌育q，

本文编号：1166664