H3N2亚型猪流感病毒致病性试验及其反向遗传操作系统的构建

发布时间：2017-11-15 00:20

  本文关键词：H3N2亚型猪流感病毒致病性试验及其反向遗传操作系统的构建

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【摘要】：猪拥有两种唾液酸受体(SAα-2,3-Gal和SAα-2,6-Gal),使其可以被人或禽流感病毒感染,因此被看作产生重组病毒的“混合容器”。2009年H1N1亚型流感病毒(pdm/09)大暴发,引起人类流感大流行,并引入到猪群中,目前,猪群中出现多种形式重组的猪流感病毒(Swine Influenza Virus, SIV)。因此,加强对SIV的监控并了解其生物学特性对于防控人流感暴发具有重要的公共卫生意义。为了阐明新型重组H3N2亚型SIVs对猪的致病性,本研究选用携带pdm09病毒的内部基因(PB2、PB1、PA、NP和M)和季节性人流感病毒的表面基因(HA和NA)获得的两株H3N2亚型SIVs,即A/Swine/Guangxi /NNXD/2013和A/Swine/Guangxi/JG1/2014(分别简称为NNXD和JG1),分别通过气管接种途径感染10只仔猪,每组4只,阴性对照2只。感染结果发现在感染后3天和5天的鼻拭子中均能检测到病毒,说明感染流感病毒后猪可以通过鼻腔进行排毒。3 dpi和5 dpi剖杀发现,两组病毒都能在肺脏中复制,其中JG1组肺组织和肺洗液中的病毒含量更高(肺组织可达104PFU/mL,肺洗液中可达104.91PFU/mL),肺部病变方面,肺泡结构破坏更严重,炎性反应更明显。为了探索NS基因在引起猪致病性差异方面的作用,本实验通过RT-PCR技术分别对NNXD株的8个基因片段及JG1株的NS片段进行了特异性扩增,再经过一系列克隆技术,将这些片段分别连接至pHW2000双向表达载体上,成功构建了具有感染性的重组质粒。然后通过细胞转染技术,将重组质粒转染到293T和MDCK共培养细胞中,以期拯救出rgNNXD和rgNNXD-JG1/NS。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65

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本文编号：1187610