HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究

发布时间：2017-11-20 18:29

  本文关键词：HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究

  更多相关文章： 分娩 HSP70 ERK1/2 ESR2 PFT-μ LPS IL-8

【摘要】：参与分娩启动的机制和因素有很多,包括细胞凋亡、免疫炎症调控因子和激素。然而,具体的作用机制尚不清楚。HSP70蛋白是热休克蛋白家族中最重要的成员之一,有多种生物学功能。有报道称HSP70直接或间接参与细胞凋亡,免疫炎症反应和激素刺激响应。为了探索HSP70参与分娩启动的分子机制,我们通过转染HSP70家族两个代表性基因(HSPA1A和HSPA8)的人重组质粒和其si-RNA于人羊膜上皮细胞(WISH细胞),过表达和敲低两个基因。然后通过Western blot和RT-PCR分析,检测几个通路的标志基因表达变化(细胞凋亡:BAX、BCL2和FAS;免疫炎症反应:TLR4、TAP1和IL-8;雌激素刺激响应:ESR2)。结果表明在WISH细胞中,HSPA1A和HSPA8的过表达下调BAX、FAS、BAG2和ESR2,上调BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8;HSPA1A和HSPA8表达的敲低上调BAX、FAS、BAG2和ESR2,下调BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8。初步表明了HSPA1A和HSPA8有抗细胞凋亡的性质,并且参与免疫炎症反应以及雌激素信号通路。也即HSPA1A和HSPA8可能通过细胞凋亡、免疫炎症反应和雌激素刺激响应参与分娩。另外,定量和Western blot的结果表明,基因表达水平变化最剧烈的是IL-8和ESR2。然后,通过使用ERK1/2磷酸化特异性抑制剂--PD98,059,处理WISH细胞,以及通过ELISA分析雌二醇(E2)的变化情况。结果表明,HSPA1A和HSPA8可以通过抑制ERK1/2的磷酸化调控ESR2的表达,进而影响雌激素刺激的响应。最后,通过对妊娠15天的孕鼠腹腔注射LPS,构建早产鼠模型。用HSPA1A的特异性抑制剂--PFT-μ处理LPS诱导的早产鼠模型,取小鼠胎膜进行免疫组化。结果表明,当仅用PFT-μ处理孕鼠时,IL-8的表达下降而ESR2的表达上升;当用PFT-μ处理LPS诱导的早产鼠模型时,IL-8的表达上升而ESR2的表达下降。也即,HSPA1A的抑制可通过减少IL-8的表达和增加ESR2的表达抑制早产的发生。且以上所有体内试验的结果和体外细胞试验的结果一致,这进一步证明了HSPA1A和HSPA8在分娩中的作用。总之,HSPA1A和HSPA8可以通过刺激免疫炎症反应和促进雌激素的刺激响应来诱导分娩启动。也即,在分娩期间,HSPA1A和HSPA8超表达时,HSPA1A和HSPA8可以通过刺激免疫炎症反应,促进雌激素的刺激响应,诱导分娩。HSPA1A和HSPA8的表达保持平衡,分娩可以顺利的进行;反之,HSPA1A和HSPA8表达失衡,则会导致早产等疾病的发生。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S814

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本文编号：1208069