牛结核病皮内变态反应检测抗原的筛选及应用研究

发布时间：2017-12-01 13:25

  本文关键词：牛结核病皮内变态反应检测抗原的筛选及应用研究

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【摘要】：牛结核病(Bovine tuberculosis)是一种由牛结核分支杆菌(Mycobacterium bovis)等引起的以呼吸道系统感染为主的人畜共患慢性消耗性传染病。由于牛结核分支杆菌拥有广泛的宿主,牛是最敏感的宿主之一,人们经由未经消毒的病牛奶就可被结核菌感染,而人结核病又可以传染给牛,因此,人畜之间的交叉感染是造成结核病广泛流行传播的重要原因。这是国内外迫切要解决的一个非常严重的公共安全问题。现阶段,“检疫—扑杀”是国内外对于牛结核病防控的主要措施,及时准确地诊断牛结核病是防控牛结核病的重中之重。结核菌素试验(Tuberculin test,TST)是OIE推荐使用的检测牛结核病的方法,这种检测方法是基于Ⅳ型变态反应的一种以结核菌素的纯化蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)或旧结核菌素(OT)为抗原诱发迟发型细胞超敏反应的皮内检测方法。牛结核菌素(PPD-B)是由分支杆菌培养物灭活提纯得到,生产过程需要牛分支杆菌强毒株,存在散毒危险,并与禽结核菌素(PPD-A)、环境中广泛存在的分支杆菌、BCG存在共同抗原,再因其是多种蛋白、脂类和糖的混合物,定性定量困难,批次间的稳定性难以保持,试验中个体的免疫能力还会影响PPD的应答水平。当然,除结核菌素皮试以外还有,如抗体检测法、IFN-γ体外释放法等来诊断牛结核病,但这些方法的关键之一就是选择最为灵敏的特异性反应抗原来辅助诊断。因此,用PPD来作为诊断抗原,其特异性较差,容易出现假阳性的诊断结果,并且牛分支杆菌感染机体过程中分泌多种抗原,使用单个抗原检测灵敏度低,而重组牛分支杆菌特异性蛋白成份明确、易于质控、特异性较高且无生物安全隐患等优点。所以,为提高检测的特异性,排除部分分支杆菌感染和BCG接种后的干扰,有必要开发特异性强的重组基因抗原。鉴于以上原因,本研究采用皮内变态反应为基础的实验方法,用卡介苗(BCG)和新金分支杆菌、草分支杆菌、副结核分支杆菌等不同的分支杆菌来免疫豚鼠,用纯化出的重组融合蛋白MPB70-64、MPB83-70-63-64、MPB83-70-ESAT6-CFP10、ESAT6-CFP10、MPB51-63和MPB63-64,以及PPD对54只免疫豚鼠诱发DTH反应,测量数值后进行差异性对比,筛选出MPB70-64、MPB83-70-63-64、MPB83-70-ESAT6-CFP10及ESAT6-CFP10四种特异性较高的重组融合蛋白,因MPB83-70-63-64与其他三种重组抗原对比,其具有更高的特异性,故应用MPB83-70-63-64作为反应原对212头牛进行了皮内变态反应检测,并与PPD对比,显示以MPB83-70-63-64作为皮内变态反应检测抗原,检出的结核阳性牛和疑似阳性牛的头数均低于PPD作为反应原检出的头数,表明该抗原提高了牛结核检测的特异性。因此,MPB83-70-63-64有望作为牛结核病变态反应检测抗原,在牛结核病的防制中发挥作用。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.23

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本文编号：1241270