牦牛HSPA12B基因的克隆及其在体外受精胚胎中的定位表达

发布时间：2017-12-01 19:23

  本文关键词：牦牛HSPA12B基因的克隆及其在体外受精胚胎中的定位表达

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【摘要】：热休克蛋白70-12B基因(heat shock 70k D protein-12B,HSPA12B)是HSP70家族中重要一员。HSPA12B可通过抑制胚胎内部ROS(活性氧自由基)的产生发挥细胞保护效应,同时也可通过与肿瘤抑制因子P53发生交互作用而抑制细胞凋亡。HSPA12B的生物学功能不仅局限于线粒体上,亚细胞碎片的免疫荧光检测发现,HSPA12B也定位于细胞内的其他部位。由于现对HSPA12B蛋白功能的认识仅局限于其可促进血管内皮细胞生长方面,对其在胚胎细胞中的表达和功能研究甚少,本研究采取RT-PCR法克隆牦牛HSPA12B基因,采用实时荧光定量(RT-q PCR)和免疫荧光方法检测HSPA12B在早期体外受精胚胎2~4细胞期、5~8细胞期、桑椹胚和囊胚中的表达差异以及蛋白分布,以期从分子水平上掌握HSPA12B的蛋白结构、遗传特性及其在体外受精胚胎发育过程中的生物学作用。研究结果表明:(1)克隆得到牦牛HSPA12B基因(Gene Bank登录号:KR258751)。(2)生物学信息分析结果显示,牦牛HSPA12B基因序列具有一个长705 bp的编码区,可编码234个氨基酸,其中丙氨酸(Ala)含量最高(10.3%),天冬酰胺(Asn)含量最少(0.9%);同源性分析和系统进化树显示,它与黄牛(bos taurus)HSPA12B基因的同源性最高,为99.5%,表明HSPA12B基因在进化中具有高度保守性;编码产物无信号肽,为非跨膜蛋白,不属于分泌蛋白,整体表现为亲水性。(3)HSPA12B基因在牦牛体外受精2~4细胞期胚胎、5~8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表达;HSPA12B在2~4细胞期胚胎中的相对表达量分别是在5~8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中相对表达量的14.8148、4.2699和40.4858倍;HSPA12B在2~4细胞期胚胎中的相对表达量,均与在5~8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的相对表达量差异性极显著(P0.01)。(4)牦牛早期体外受精胚胎各时期中均有HSPA12B蛋白荧光,在2~4细胞期胚胎、5~8细胞期胚胎和桑葚胚中,胞核HSPA12B的表达量较胞质弱;在囊胚中胞核HSPA12B的表达量较胞质强。提示,在体外培养的环境应激条件下,牦牛体外受精胚胎发育至囊胚时,HSPA12B蛋白的分布可能发生了移位。(5)HSPA12B在牦牛体外受精胚胎的发育过程中发挥重要作用。HSPA12B可能起着抑制细胞凋亡,延缓细胞衰老,调控胚胎早期发育的作用。本实验分析了HSPA12B蛋白的基本结构和遗传特性,并检测了HSPA12B在不同时期的牦牛体外受精胚胎中的分布和表达,以期从胚胎发育角度探讨热休克蛋白抑制细胞凋亡,延缓细胞衰老,调控细胞发育等作用,文章为进一步研究HSPA12B在体外受精胚胎发育过程中的细胞保护作用提供了参考。
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823.85

【参考文献】

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本文编号：1242181