siRNA干扰AR基因对梅花鹿鹿茸软骨细胞生长发育的研究

发布时间：2017-12-13 15:32

  本文关键词：siRNA干扰AR基因对梅花鹿鹿茸软骨细胞生长发育的研究

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【摘要】：在雄性梅花鹿的生茸期内,血浆中雌二醇和睾酮的含量会从高峰值同时下降,并在整个生茸期维持较低的水平。说明一定范围内的低水平的雄激素有利于雄鹿的生茸。在赤鹿的鹿茸组织中测定出了AR的转录物。而雄激素对鹿茸的生长发育的调控作用需要通过与AR特异性结合形成复合物后起作用,AR是由受体基因编码控制的,如果AR基因发生变异,一定会影响AR及其复合物的结构和功能,并最终导致其生物学效应的改变,就可能会对鹿茸的生长和发育产生相应的影响。本研究先通过克隆出梅花鹿鹿茸软骨细胞AR基因的序列,再以AR为靶基因设计相应的siRNA,应用siRNA干扰技术,并将筛选出的高效的siRNA导入梅花鹿鹿茸软骨细胞,研究siRNA对软骨细胞AR蛋白和mRNA的表达,以及对软骨细胞的增殖、周期和凋亡的影响,探讨雄激素及其受体对鹿茸生长的调控机制。研究的内容和结果如下:(1)获得的梅花鹿AR部分序列长为2346 bp,序列比对分析表明,该序列为梅花鹿AR基因cDNA序列,开放阅读框部分共编码781个氨基酸。序列已经向Genbank提交,登录号为KT599413.1.(2)序列比对结果表明AR基因和AR蛋白在梅花鹿与狍子、牛、绵羊间的同源性均较高。与牛(Bos taurus)、绵羊(Ovis aries)、狍子(Capreolus)的核苷酸同源性均为98%;与人(Human)的核苷酸同源性为89%。与牛(Bos taurus)、绵羊(Ovis aries)、狍子(Capreolus)氨基酸序列进行比对同源性均为98%;与人(Homo sapiens)的氨基酸序列同源性为87%.(3)通过RNAiMax转染软骨细胞48 h后,RT-PCR方法对比分析siRNA处理组与对照组,mRNA的相对表达量极显著降低(P0.01),抑制率在70%左右;Western Blot法检测结果表明处理组的AR蛋白的表达情况显著降低(P0.05),说明siRNA的干扰效果明显。(4)AR siRNA对鹿茸软骨细胞的凋亡影响不显著。收集的上清检测结果表明睾酮和雌二醇的激素水平变化不明显(P0.05);而细胞周期结果显示试验组细胞周期阻滞在S期(P0.01),说明siRNA处理细胞能够显著的抑制细胞增殖。结果表明,AR在鹿茸的生长过程中有重要的作用。AR siRNA能够降低AR mRNA和AR蛋白的表达,通过调控细胞周期S期的比例抑制细胞的增殖,也间接说明雄激素对梅花鹿鹿茸软骨细胞的生长发育有促进作用。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S825

【参考文献】

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本文编号：1285700