猪伪狂犬病毒引起的细胞自噬和凋亡的初步研究

发布时间：2017-12-22 17:12

  本文关键词：猪伪狂犬病毒引起的细胞自噬和凋亡的初步研究　出处：《东北农业大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒科、疱疹病毒属,又被称为猪疱疹病毒1型,可以引起多种家畜和野生动物感染发生伪狂犬病,给养猪业造成了巨大经济损失。细胞自噬能够通过自我消化细胞成分的方法调节蛋白质合成和蛋白质降解之间的平衡。细胞凋亡在生物体进化、维持内环境稳定以及在多个系统的发育中起着重要的作用。细胞自噬与凋亡是引起细胞程序性死亡的主要途径,二者共同决定了细胞在受到病原入侵时的命运,因此自噬和凋亡之间的平衡对病毒的复制周期的实现和致病性有着至关重要的影响。自噬和凋亡具有部分通用的上游信号途径,有时可能会导致自噬和凋亡的共同发生;同时,细胞可以在自噬和凋亡之间互相转化。本实验结果表明PRV感染对细胞自噬反应有双重影响,在感染早期阶段,PRV能够诱导细胞自噬;随着病毒蛋白的表达,细胞自噬反应被抑制。通过流式细胞检测技术和Western blot分析发现PRV能够诱导Vero细胞发生caspase依赖性细胞凋亡。本实验通过化学抑制剂和诱导剂调节PRV引起的细胞自噬或凋亡,研究表明,在自噬体形成阶段诱导细胞自噬能够抑制细胞凋亡;在自噬体形成阶段抑制细胞自噬能够诱导细胞凋亡;抑制自噬体与溶酶体融合后的降解能够促进细胞凋亡;用Caspase-3抑制剂抑制细胞凋亡后,自噬相关蛋白LC3-I至LC3-II的转化和SQSTM1/P62的降解增多。以上结果表明PRV引起的细胞自噬和凋亡作用拮抗。自噬与凋亡的相互关系能够影响PRV的复制,自噬增多或者自噬体与溶酶体融合后的降解被抑制均能抑制病毒的复制。已有研究表明PRV早期蛋白US3能够通过活化PI3K/AKT途径抑制细胞凋亡,为了确定US3能否通过该途径对细胞自噬产生影响,本实验通过PI3K、AKT抑制剂处理感染PRV的细胞后,发现细胞自噬增多。在感染He N1病毒株的细胞中转染US3质粒,与对照细胞相比,转染US3质粒后AKT的磷酸化增多,细胞自噬被抑制;分别用△US3 He N1病毒株和HeN1病毒株感染Vero细胞,研究表明感染△US3 He N1病毒株的细胞与感染HeN1病毒株的细胞相比,AKT的磷酸化减少,细胞自噬增多。以上实验结果表明病毒早期蛋白US3可能通过活化PI3K/AKT途径抑制细胞自噬。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
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本文编号：1320298