副猪嗜血杆菌自然转化方法的建立及条件优化
本文关键词： 副猪嗜血杆菌 基因缺失株 自然转化 转化频率 出处：《农业生物技术学报》2017年12期 论文类型：期刊论文
【摘要】：自然转化可用于构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的基因缺失株,对于研究其毒力因子和致病机制有重要的意义。本研究采用控制变量法,对副猪嗜血杆菌自然转化过程中的实验条件进行优化。分别比较了点样时细菌不同生长阶段、点样孵化不同时长、转化体系细菌不同浓度、外源环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)不同浓度、外源质粒不同浓度及转化后平板孵化不同时间等条件下的自然转化频率。结果表明,副猪嗜血杆菌的平板转化实验在细菌处于对数生长后期(OD600≈1.5~1.7)时点样孵化,孵化时长为13 h,体系中外源质粒的浓度大于0.1μg/μL,转化后平板孵育5 h时,副猪嗜血杆菌自然转化以较高频率发生。本研究确定了副猪嗜血杆菌自然转化过程中的最佳条件,为副猪嗜血杆菌毒力因子及致病机制等基因功能的相关研究提供了参考。
[Abstract]:Natural transformation can be used to construct the gene deletion strain of Haemophilus parasuis HPS. It is of great significance to study virulence factors and pathogenicity mechanism. Control variable method is used in this study. The experiment conditions of Haemophilus parasuis during natural transformation were optimized. Different growth stages of bacteria, different incubation time, different concentration of bacteria in transformation system were compared. Different concentrations of exogenous cyclic adenosine monophosphate were observed. The natural transformation frequency of exogenous plasmids in different concentrations and different incubation time after transformation was studied. The plate transformation test of Haemophilus parasuis incubated in the late stage of logarithmic growth, the incubation time was 13 hours. The concentration of exogenous plasmids in the system was greater than 0.1 渭 g / 渭 L and incubated with the plate for 5 h. The natural transformation of Haemophilus parasuis occurred at a higher frequency. In this study, the optimal conditions for the natural transformation of Haemophilus parasuis were determined. It provides a reference for the study of virulence factor and pathogenicity of Haemophilus parasuis.
【作者单位】： 四川农业大学动物医学院猪病研究中心;西南医科大学基础医学院;
【基金】：公益性行业(农业)科研专项(No.201303034)
【分类号】：S852.612
【正文快照】： *同等贡献作者Establishment and Condition Optimization for Natural TransformationMethod of Haemophilus parasuisJIN Jin1*DAI Ke1*WEN Xin-Tian1HE Lv-Qin1ZHANG Lu-Hua1,2ZHAO Yu-Jia1CAO San-Jie1HUANG Xiao-Bo1WU Rui1ZHAO Qin1WEN Yi-Ping1**1 Research Center of
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，本文编号：1447352
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