H5亚型禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
本文关键词： 禽流感病毒 H5亚型 单克隆抗体 出处：《湖南农业大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：本研究采用高致病性禽流感病毒(HPAIV) H5亚型A/duck/Guangdong/S 1322/201 0(DK/GD/S1322/2010)、A/duck/Xinjiang/S3391/2012(DK/XJ/S3391/2012)、A/chicken/Li aoning/S4092/2011 (CK/LN/S4092/2011)三株毒株作为免疫原,免疫6周龄到8周龄BALB/c雌性小鼠,使用经过加强免疫后小鼠脾细胞同骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,使用血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选,得到6株H5亚型HA特异性单克隆抗体(McAbs),分别命名为A4、D11、F3、G2/B6、C8。HI检测A4、D11、F3、G2、B6、C8六株单抗的细胞培养上清和腹水抗体效价分别为23、22、23、24、22、22和211、211、213、213、28、28。获得的6株单抗的重链均为IgG1和IgM,轻链均为k链。染色体计数分析各株杂交瘤细胞的平均染色体数在102-108之间。6株单克隆抗体HI试验和中和实验显示,6株单克隆抗体不与其他亚型流感病毒反应,A4、D11与亲本毒株DK/GD/S1322/2010所在clade2.3.2分支病毒反应性良好。不与clade2.3.4和7分支病毒反应；F3、G2与亲本毒株DK/XJ/S3391/2012所在clade2.3.4分支病毒同源性较高的H5N8亚型病毒反应性较好,与大部分2.3.4分支病毒、2.3.2、7分支病毒不反应；B6、C8与亲本毒株CK/LN/S4092/2011所在的7分支病毒也是部分反应。所制备的单克隆抗体含有识别亲本毒株的抗原位点,且在鸡胚中和实验中表现一定的中和活性。IFA结果表面,6株单克隆抗体能够识别MDCK细胞内感染的H5亚型禽流感病毒亲本毒株。利用DK/GD/S 1322/2010病毒株和PCAGGS载体构建HA蛋白质粒,通过、Vestern-blot反应能够与人工合成的HA蛋白反应。HA亚型特异性单克隆抗体的制备成功为H5亚型AIV的诊断与鉴别奠定了物质基础。
[Abstract]:In this study, the H5 subtype of highly pathogenic avian influenza virus (HPAIV) was subtype A / duckr / Guangdongr / S 1322/201 (. DK / GD / S 1322 / 2010. A / A / DK / XJ / Xinjiang / S 3391 / 2012DK / XJ / S 3391 / 2012). Three strains of the virus were used as immunogen for Ar / chicken / Li aoning/S4092/2011 / LN / LN / S4092 / 2011. BALB/c female mice aged from 6 weeks to 8 weeks were immunized and fused with myeloma cells (SP2 / 0) after enhanced immunization. Six strains of H5 subtype HA-specific monoclonal antibody were screened by hemagglutination inhibition (HI) and ELISA, and named A4D11F3F3G2 / B6, respectively. The titers of supernatant and ascites antibody of A4D11F3G2OB6C8 McAbs were 2322, 2324, 2222 and 211, respectively, by C8.The titers of antibody in culture supernatant and ascitic fluid were 2322 and 211, respectively. The heavy chains of the 6 McAbs were IgG1 and IgM. The average chromosome number of the hybridoma cells was 102-108. 6 strains of monoclonal antibody HI test and neutralization test showed. 6 strains of monoclonal antibodies did not react with other subtypes of influenza virus (A4). D11 reacted well with the clade2.3.2 branch of parent strain DK/GD/S1322/2010 and did not react with clade2.3.4 and 7 branch virus. F3G 2 was more responsive to the H5N1 N8 subtype virus, which was homologous to the clade2.3.4 branch of the parent strain DK/XJ/S3391/2012. It did not react with most of the 2. 3. 4 branch virus (2. 3. 2). B6C8 also partially reacted with the 7 branch viruses of parent strain CK/LN/S4092/2011. The monoclonal antibodies prepared contained antigenic sites to recognize parental strains. And showed certain neutralization activity in chicken embryo neutralization experiment. IFA result surface. 6 strains of monoclonal antibody could recognize the parent strain of H5 subtype avian influenza virus infected in MDCK cells. DK/GD/S was used to identify the H5 subtype avian influenza virus strain. 1322/2010 virus strain and PCAGGS vector were used to construct HA protein particles. Yes. The Vestern-blot reaction can react with synthetic HA protein. The preparation of HA subtype specific monoclonal antibody has laid a solid foundation for the diagnosis and identification of H5 subtype AIV.
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65
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，本文编号：1447797
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