广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究

发布时间：2018-01-22 22:06

本文关键词： 水牛陆川猪毛色黑素体皮质素受体1(MC1R) 分子机制　出处：《广西大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：毛色是识别动物品种和种属的重要特征,也是动物品种培育中遗传一致性观测的重要指标。畜禽之间毛色差异主要是由于黑色素细胞中真黑素和褐黑素的存在、分布和比例差异造成。本研究以本地沼泽型水牛和陆川猪为研究对象,应用PCR的方法克隆MC1R基因的编码区序列,通过qRT-PCR技术分析毛色形成的相关基因(MC1R、KIT、 MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在不同毛色牛皮肤组织和陆川猪黑、白皮肤组织上的表达,并应用Western-blot的方法检测MC1R、MITF和TYR蛋白在牛和陆川猪黑白皮肤上的蛋白质表达水平,还应用HE染色观察了陆川猪皮肤的结构和应用免疫组化技术对TYR蛋白在陆川猪皮肤上定位进行分析。主要研究结果如下：1.广西本地沼泽水牛和陆川猪MC1R基因的克隆与分析。测序结果显示水牛和陆川猪MC1R基因的编码区片段大小分别为954bp和1115bp,分别编码317个和321个氨基酸。以相同的方法克隆并测序了本地饲养的摩拉水牛、白化沼泽水牛和黄牛的MC1R基因序列,通过多重序列比对发现,沼泽水牛与白化沼泽水牛MC1R基因有几处碱基发生置换。在第476个碱基位点上由C→T,第618个碱基位点由C→G,881个碱基位点A→G,930和931的碱基位点GA→AG。第159个氨基酸由丝氨酸变成了苯丙氨酸,第310个氨基酸由谷氨酸变成丙氨酸,第294个氨基酸由天冬氨酸变成了丙氨酸,发生了非同义突变。第206个氨基酸依然是酪氨酸,该处对应碱基发生的是同义突变。2.毛色形成相关基因在几种牛皮肤中的表达谱构建及蛋白表达分析。应用qRT-PCR技术,检测了毛色形成的相关基因(MC1R、KIT、 MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在几种牛皮肤组织的表达。结果显示,白化沼泽水牛皮肤中表达的MC1R、KTI、MITF和TYR基因含量显著低于这些基因在沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛皮肤中的表达量(P0.05)。摩拉水牛皮肤酪氨酸酶家族(TYR、TYRP1和DCT)基因在mRNA水平表达量显著高于沼泽水牛、白化沼泽水牛和黄牛(P0.05)。DCT基因在摩拉水牛皮肤的表达量显著高于沼泽水牛和白化沼泽水牛(P0.05)。在白化沼泽水牛和黄牛几乎检测不到TYPR1的表达。应用western-blot技术,检测MC1R、MITF和TYR基因在蛋白质水平上在几种牛皮肤上的表达情况。结果显示,摩拉水牛MC1R、MITF和TYR表达量低于沼泽水牛。白化沼泽水牛在所选的这三个基因蛋白中的表达情况也是低于沼泽水牛,尤其是白化沼泽水牛TYR基因蛋白条带非常浅,这与上一步进行的qRT-PCR试验结果一致。3.毛色形成相关基因在陆川猪黑、白皮肤中的表达谱构建及蛋白表达分析。应用qRT-PCR技术检测了毛色形成的相关基因(MC1R、 KIT、MITF、TYR、TYRP1、DCT和EDNRB)在同一头陆川猪黑、白皮肤组织的表达。结果显示,在mRNA水平,酩氨酸酶TYR基因和KIT基因在陆川猪黑、白皮肤上的表达差异不显著(P0.05),相对表达量分别为0.8±0.05和1.38±0.04。其他基因MC1R、TYRP1和DCT基因的mRNA表达在黑皮肤中的相对表达量较高,分别为13.83±1.67,12.38±1.45和7.73±0.43,显著高于白皮肤(P0.05)。通过HE染色结合免疫组织化学陆川猪皮肤组织结果显示,酪氨酸酶TYR基因在陆川猪黑、白皮肤组织中均有阳性着色,具体着色的部位是毛囊部位。Western-blot结果也显示,陆川猪黑、白皮肤均能检测到TYR蛋白且二者表达水平接近,结合之前的qRT-PCR检测和免疫组化结果,均指向TYR基因在mRNA和蛋白水平上的表达差异不显著。
[Abstract]:The expression of MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP , DCT and EDNRB on the skin of cattle and Luchuan pigs was analyzed . The results showed that the MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP , DCT and EDNRB genes were cloned and sequenced . The results showed that the expression of TYR gene ( MC1R , KIT , MITF , TYR , TYP1 , DCT and EDNRB ) in black and white skin of Luchuan pig was not significant ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S828;S823.83

【参考文献】