新城疫病毒感染树突状细胞引起T淋巴细胞增殖抑制的初步研究

发布时间：2018-02-10 02:07

  本文关键词： 新城疫病毒 树突状细胞 树突状细胞特异性粘附分子-3-结合非整合素分子 巨胞饮 淋巴细胞增殖　出处：《西北农林科技大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Diseases Virus,NDV)引起的一种热性、急性的禽类传染病。作为目前在世界范围内广泛流行的严重的禽类传染病,因其巨大的危害性,给养殖业造成了巨大的损失。对该病的预防主要以接种疫苗为主,但因为ND的基因型等的差异性和多样性,加之ND在免疫抑制方面的作用,使传统的疫苗难以起到对其高效安全的保护效果。树突状细胞(Dendritic cells,DC)是已知的功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)。可以通过巨胞饮、吞噬和受体介导的内吞等方式提呈抗原。DCs作为连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,能够对病原发挥调节作用。一些病毒可以通过感染DCs起到逃避机体免疫监视,促进感染等作用。树突状细胞特异性粘附分子-3-结合非整合素分子(DC specific intercellular-adhesion-molecule-3 grabbing nonintegrin,DC-SIGN)是DCs表面的C型凝集素受体,属于Ⅱ型跨膜蛋白,参与DCs对病原体的识别与摄入,在DCs的黏附,迁移,炎症反应,激活初级T细胞,触发免疫反应等环节都需要DC-SIGN的参与。本研究对DC-SIGN在NDV感染DCs时对T淋巴细胞增殖的影响及NDV进入DCs的主要途径,开展了以下三部分研究。第一部分,检测NDV强毒株Herts/33和弱毒株NDV-GFP(La Sota骨架)感染DCs后,能够刺激DCs成熟,且DCs表面共刺激分子及细胞因子表达发生变化,发挥免疫调节的功能。能有效激活T淋巴细胞,启动初始免疫应答。第二部分,利用Transwell试验检测了DCs在NDV刺激CD4+T淋巴细胞增殖中的作用,表明NDV活病毒抑制T细胞增殖需要依赖DCs和T细胞相互接触。流式细胞术和Western blot试验证实DC-SIGN抗体对NDV感染DCs影响T细胞增殖的作用,显示DC-SIGN在NDV感染DCs与T细胞时发挥抑制作用。流式细胞术检测细胞巨胞饮抑制剂Rottlerin在NDV感染DCs中发挥的作用,说明NDV感染DCs可能主要通过巨胞饮的途径完成。第三部分,构建了DC-SIGN稳定表达细胞系。真核表达载体pcDNA3.1中连入DC-SIGN基因,转染HeLa细胞,经G418筛选获得了稳定表达DC-SIGN蛋白的细胞系。经PCR,Western blot方法验证,该细胞系能够正确并且稳定表达DC-SIGN蛋白,反复冻存和复苏以及连续传代培养数代后的细胞仍然能够稳定表达DC-SIGN蛋白,说明细胞系构建成功,这为后续研究NDV病毒蛋白与DC-SIGN蛋白的相互作用奠定了基础。
[Abstract]:Newcastle disease (NDV) is a kind of feverish, acute avian infectious disease caused by Newcastle Diseases virus (NDV). The prevention of the disease is mainly vaccination, but because of the difference and diversity of ND genotypes, plus the role of ND in immunosuppression, Dendritic cells (DC) are the most potent antigen presenting cells known to be the most potent antigen presenting cells (APC). Phagocytosis and receptor-mediated endocytosis present antigens. DCs act as a bridge between innate and acquired immunity and regulate pathogens. Some viruses can evade immune surveillance by infecting DCs. DC specific intercellular-adhesion-molecule-3 grabbing nonintegrin DC-SIGN is a C-type lectin receptor on the surface of DCs, belonging to type 鈪，

本文编号：1499405