苏鲁部分地区禽致病性大肠杆菌的分离及2个O78分离株致病性的研究

发布时间：2018-02-24 09:18

本文关键词： 禽致病性大肠杆菌 O血清型 O78 毒力基因致病性　出处：《扬州大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：禽致病性大肠杆菌引起禽类的大肠杆菌病,包括心包炎、肝周炎、气囊炎、呼吸道疾病和败血症等,给全世界各国的养禽业都带来了严重的经济损失。为了对禽致病性大肠杆菌的流行情况及发病情况进行监控以便给养禽业降低经济损失,我们从2013年1月份到2014年12月份在江苏省的南通市、盐城市、常州市、淮安市及山东省青岛市的规模化养殖场及小型养殖户中有大肠杆菌病症状的肉鸡中进了禽致病性大肠杆菌的分离。本次分离禽致病性大肠杆菌的肉鸡,日龄在1日龄到32日龄之间。通过相关生化鉴定,共分离及鉴定出禽致病性大肠杆菌203株,其中以江苏省的南通地区和山东省的青岛地区为主,分别为96株和97株,其他市区共10株。通过玻板凝集和试管凝集试验测定禽致病性大肠杆菌的O血清型,共测出159个分离株的O血清型,未定型的菌株44株。其中O血清型主要以O78、O45、O1、O142、 o65、O24、O161等O血清型为主,约占定型菌株的63.5%,除此之外还涉及很多其他的O血清型。本次分离结果显示不同地区的O血清型的分布存在着差异,其中南通地区以O78、O45、O142、O161、O65、O24为主,共60株,共占南通地区定型菌株的75%,山东省青岛地区O78、O1、O18、O161为主,共34株,占定型菌株的46.6%,其他地区以078为主。结果表明：不同地区禽致病性大肠杆菌的O血清型的流行存在着差异,但是不同地区都是以078为主要流行株,表明078是引起禽类大肠杆菌病的一个主要的原因。除了O血清型,同时对100株大肠杆菌的种系发生型进行了检测,其中A型菌株占30%、B1型菌株占31%、B2型菌株占2%、D型菌株占37%。对与禽致病性大肠杆菌的毒力密切相关的六个毒力基因进行了检测,包括Iss、iroN、tsh、cvaC、iutA、irp-2,检出率分别为93.5%、73.1%、30.4%、37.2%、88.5%、34.6%,与国内外结果基本一致。为了确定分离到的禽致病性大肠杆菌是否具有毒力以及毒力的强弱,我们选择其中的以078及045等血清为主的46个分离株进行了1日龄雏鸡的致死性试验,对1日龄雏鸡采取左胸气囊注射,107CFU的菌液进行攻毒,结果表明大部分(63%)菌株具有高致病性。通过对O血清型的鉴定可知,078为本次主要的流行菌株,该血清型也是国内外的流行血清型,为了了解078分离株的毒力之间差异及可能的原因,我们选取了不同地区的2个078分离株APEC/QD/04分离株和APEC/HA/01分离株进行了种系发生分型、脉冲场凝胶电泳、LD50测定、35日龄的SPF鸡及肉鸡的体内动态分布试验并制作了相应的病理切片,以观察病理变化。种系发生分型表明两个菌株分别属于B1型和A型,脉冲场凝胶电泳结果表明两株菌株之间存在着遗传差异,APEC/QD/04分离株和APEC/HA/01分离株的LDso分别为108.5CFU、104.7CFU,通过35日龄SPF鸡和肉鸡采用左胸气囊接种108CFU菌液,结果表明两菌株均可以对35日龄SPF鸡和肉鸡造成感染,并且分析显示两株菌株之间存在着毒力的差异,通过对这两株菌的毒力基因进行检测发现APEC/QD/04分离株和APEC/HA/01分离株毒力基因存在差异,APEC/QD/04分离株比APEC/HA/01分离株毒力弱,APEC/QD/04分离株比APEC/HA/01分离株缺少tsh、cvaC、irp-2基因,这也许是两个菌株之间致病性存在差异的一个原因。但是禽致病性大肠杆菌的致病机理比较复杂,影响菌株毒力的原因有很多,也有很多未知的毒力基因还有待进一步的发现。通过两个菌株的致病性试验,表明APEC/QD/04分离株是一个中毒力的菌株,而APEC/HA/01分离株是一个强毒力菌株,这两个菌株可以作为078血清型不同毒力的模式菌株。
[Abstract]:In order to reduce economic losses to poultry industry , there were only 96 strains and 97 strains isolated from poultry industry in Nantong , Jiangsu Province , O78 , O142 , O161 , O65 , O24 , O161 , O161 , O24 , O161 and other regions . In order to find out the difference between the virulence and virulence of the isolates , the results showed that there were genetic differences between two strains : Iss , iroN , tsh , cvaC , iutA and irp - 2 . however , that pathogenic mechanism of the pathogenic E . coli is complex , the cause of virulence of the strain is quite complex , and there are many unknown virulence genes .

【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.61

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