靶向鸭肠炎病毒NP基因RNAi对DEV增殖的影响

发布时间：2018-02-26 07:31

  本文关键词： 鸭肠炎病毒 核衣壳蛋白 RNA干扰 荧光定量PCR　出处：《畜牧兽医学报》2017年01期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为探究核衣壳蛋白(NP)对鸭肠炎病毒(DEV)增殖的影响,笔者根据GenBank上DEV-NP基因序列,设计并构建pSilencer-DEV-NP,采用三种不同方式处理转染鸭胚成纤维(DEF)细胞后,应用荧光显微镜法和FQ-PCR法分析pSilencer-DEV-NP对DEV增殖的影响,结果显示:经荧光显微镜法观察,pSilencer-DEV-NP-l~4在DEF细胞中均呈现绿色荧光;FQ-PCR法扩增并计算,pSilencer-DEV-NP-l~4对DEV增殖的沉默效率分别为81.10%、72.69%、77.35%和67.69%;采用三种方法处理,pSilencer-DEV-NP-1对DEF细胞中DEV的增殖均有沉默作用,但沉默效率不尽一致,其中先后转染后感染时pSilencer-DEV-NP-1的沉默效果最好,在处理60h时沉默效率高达69.20%;同时转染和感染时pSilencer-DEV-NP-1的沉默效果次之,在处理48h时沉默效率最好仅达63.79%;先感染后转染时pSilencer-DEV-NP-1的沉默效果较差,在处理60h时沉默效率最高仅为52.58%。上述研究结果提示,核衣壳蛋白对鸭肠炎病毒增殖具有一定的影响,为阐明核衣壳蛋白在鸭肠炎病毒复制与增殖的作用机制奠定了理论基础。
[Abstract]:In order to investigate the effect of nucleocapsid protein (NPV) on the proliferation of duck enteritis virus (GenBank), pSilencer-DEV-NPs were designed and constructed according to the sequence of DEV-NP gene on GenBank. The effects of pSilencer-DEV-NP on the proliferation of DEV were analyzed by fluorescence microscope and FQ-PCR method. The results showed that the silencing efficiency of pSilencer-DEV-NP-lO4 in DEF cells was 77.35% and 67.699.The silencing efficiency of pSilencer-DEV-NP-lO4 on DEV proliferation was 77.35% and 67.699.The silencing efficiency of pSilencer-DEV-NP-1was 77.35% and 67.699.The silencing effect of pSilencer-DEV-NP-1 on the proliferation of DEV in DEF cells was observed by three methods. But the silencing efficiency was not consistent, among which the silencing effect of pSilencer-DEV-NP-1 was the best after transfection, and the silencing efficiency was 69.20g at 60h, and the silencing effect of pSilencer-DEV-NP-1 was the second at the same time of transfection and infection. The best silencing efficiency was 63.79 at 48h, but the silencing effect of pSilencer-DEV-NP-1 was poor after infection and transfection, and the silencing efficiency was 52.58 at 60h. The results suggested that nucleocapsid protein had a certain effect on the proliferation of duck enteritis virus. It lays a theoretical foundation for elucidating the mechanism of nucleocapsid protein in the replication and proliferation of duck enteritis virus.
【作者单位】： 贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室;遵义市动物卫生监督所;遵义市兽药饲料监测站;
【基金】：国家自然科学基金项目(31260607;31560703) 贵州省优秀青年科学人才培养计划项目(黔科合人字[2013]25号) 贵州省百层次创新型人才项目(黔科合人才[2016]4009号) 贵州省科技创新人才团队建设项目(黔科合人才团队[2015]4016号) 贵州大学研究生创新基金项目(研农2016022)
【分类号】：S852.65

【参考文献】

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3 代淑燕;寨鸿瑞;文明;刘忠伟;周碧君;;鸭肠炎病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达[J];生物技术;2008年04期

【共引文献】

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2 罗乐;熊朝丽;郑敏;吴良涛;文明;;靶向PKCI基因RNAi对DEV增殖的影响[J];基因组学与应用生物学;2016年02期

3 赵碧;熊朝丽;徐茂文;周碧君;程振涛;文明;;鸭肠炎病毒核衣壳蛋白质互作蛋白质基因荧光定量PCR检测方法的建立[J];江苏农业学报;2015年02期

4 赵军;杨孝朴;宋晓育;;鸭瘟病毒的免疫学研究进展[J];生物技术通报;2014年07期

5 汪开毓;王均;肖丹;陈德芳;黄锦炉;黄凌远;付希;王浩丞;;斑点叉尾源海豚链球菌DGX07株simA基因克隆、鉴定及分子特性分析[J];水产学报;2012年03期

6 罗丹丹;程安春;汪铭书;沈爱梅;朱德康;贾仁勇;罗启慧;崔恒敏;王印;徐志文;;鸭瘟病毒UL47基因克隆及其分子特性分析[J];中国兽医学报;2011年01期

7 张顺川;向骏;程安春;汪铭书;李丽娟;李鑫;;鸭肠炎病毒UL53截段基因的序列特性、原核表达与其抗原性检测[J];中国农业科学;2010年21期

8 沈婵娟;程安春;汪铭书;郭宇飞;信洪一;徐超;贾仁勇;韩新峰;;鸭瘟病毒UL51基因在COS-7细胞中的瞬时表达[J];中国兽医科学;2009年10期

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3 李玉峰;欧阳文军;周秋平;黄兵;马秀丽;宋敏训;杨汉春;;鸭瘟病毒部分基因的克隆与序列分析[J];中国兽医杂志;2007年03期

4 陈淑红;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;孔宪刚;;鸭肠炎病毒UL6基因的分子特征[J];病毒学报;2006年05期

5 郭宇飞;程安春;汪铭书;贾仁勇;文明;周伟光;陈孝跃;;鸭病毒性肠炎病毒荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用[J];中国兽医科学;2006年06期

6 文明;程安春;汪铭书;周毅;刘菲;袁桂萍;郭宇飞;贾仁勇;周伟光;陈孝跃;;鸭病毒性肠炎病毒的提纯及其结构蛋白SDS-PAGE分析[J];中国兽医学报;2006年03期

7 刘庆慧,黄P",韩文君;WSSV3个编码蛋白的基因密码子偏爱性分析[J];海洋水产研究;2005年04期

8 ;Cloning of Thymidine Kinase Gene of Duck Plague Virus Using Degenerate PCR[J];Agricultural Sciences in China;2005年08期

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2 赵妍;马波;王君伟;;鸭肠炎病毒UL31基因的克隆与表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

3 蒋金凤;程安春;汪铭书;路立婷;;鸭肠炎病毒gC基因免疫原性理论预测及其初步验证[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年

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6 马波;刘峰源;张杨;刘晓玫;乌伊罕;赵妍;张智慧;王君伟;;鸭肠炎病毒ul27基因编码产物B细胞线性表位优势区的初步鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

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