7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立

发布时间：2018-02-26 22:32

  本文关键词： 猪 呼吸道疾病 多重PCR 检测方法　出处：《中国农业大学学报》2017年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标准毒株序列,选择各病毒和细菌的保守序列分别设计7对特异性引物进行多重PCR。各项优化试验结果表明,当反应的退火温度为51℃,各条引物浓度均为0.8μmol/L时扩增的目的条带效果最佳;用敏感性试验检测该反应中各病毒的最小检出量分别为:1.01×10~2(PRV)、1.48×10~3(CSFV)、1.07×10~4(ASFV)、9.73×10~3(PRRSV)、1.82×10~3(HPS)、1.65×10~3(PM)和3.64×10~3(APP)copies/μL。在最优化的反应条件下进行特异性试验,结果未出现交叉反应,能检出对应病原的多种血清型,阴性对照均无非特异性扩增。该方法快捷、灵敏、特异性高,可为临床诊断与流行病学研究提供科学依据。
[Abstract]:In order to establish a multiplex PCR method for simultaneous detection of seven pathogens leading to swine respiratory syndrome (SRS), Reference was made to the standard strains of pseudorabies virus (PRV), swine fever virus (CSFV), African swine fever virus (ASFV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV), Haemophilus parahaemophilus (HPSV), Pasteurella multocida (PMN) and Actinobacillus pleuropneumoniae (APP). Seven pairs of specific primers were designed for multiplex PCRs with conserved sequences of each virus and bacteria. The results showed that when the annealing temperature of the reaction was 51 鈩，

本文编号：1539946