饲用蛋白酶体外评价及其在肉仔鸡日粮中的应用研究

发布时间：2018-03-03 08:54

  本文选题：蛋白酶　切入点：肉仔鸡　出处：《内蒙古农业大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：蛋白质饲料资源短缺是限制我国畜牧业发展的关键问题。蛋白酶可以提高饲料蛋白利用率,可在一定程度上缓解蛋白质资源短缺问题。随着蛋白酶种类和产品的不断增加,而传统评价方法(动物试验)耗时费力,无法在短时间评价大量样品。因此,如何筛选合适蛋白酶及确定最适添加剂量,需要一个能快速、准确评价蛋白酶的方法。体外法可用于快速评价饲料生物学效价,且其评价效果已得到认可。同时,体外法在饲用酶评价方面的研究已受到关注,且研究逐渐增加。然而蛋白酶不同于其它饲用酶,其存在与内源性消化酶的互作效应,使其作用效果受剂量的影响较明显,因此,体外法评价蛋白酶时对消化酶活性等参数更敏感。因此,亟需建立一个适于评价蛋白酶作用效果的体外法,并通过对影响蛋白酶作用效果的因素研究,为蛋白酶的科学评价提供方法。本文通过测定肉仔鸡(31日龄)消化道参数(pH值、消化酶活水平及含水量),并对含水量、产物分离方式及抗生素的应用进行研究,建立了一个用于评价蛋白酶对肉仔鸡作用效果的体外法。运用该方法评价了4种蛋白酶(酸性、中性、碱性和角蛋白酶)对饲料原料(玉米蛋白粉、玉米、豆粕)的作用效果,确定了各蛋白酶对玉米蛋白粉和豆粕的最适添加剂量；并进一步研究了影响蛋白酶作用效果的因素(pH、蛋白酶的复性、作用部位及蛋白酶对内源消化酶的影响)。此外,为了验证体外法评价蛋白酶作用效果的可靠性,本文还设定了体内验证试验,研究蛋白酶对肉仔鸡(31日龄)玉米豆粕型日粮的作用效果。试验结果：1.试验建立了一套用于评价蛋白酶对肉仔鸡作用效果的体外法。称取1.0000 g饲料样品。(嗉囊消化期)加3.5 mL适宜浓度盐酸溶液,调pH至4.9,加0.5 mL氯霉素液抑制微生物生长,全温振荡培养箱消化；(胃消化期)加0.5 mL适宜浓度的盐酸溶液,调pH 3.3,加0.5 mL胃蛋白酶-盐酸溶液消化；(肠消化期)加1 mL适宜浓度的NaHCO3溶液调节pH 6.2,再加26 mL“小肠液”消化。三个阶段的温度和转速均为：40℃、120转/mmin,消化时间分别为：50 min、61 min和163 min。消化结束后宜采用5 ml磺基水杨酸(20%)沉淀蛋白,静置30 min后,离心,取上清液用于分析测定。2.四种蛋白酶对饲料原料最适添加量和添加效果的研究。不同添加剂量的4种蛋白酶对豆粕粗蛋白体外消化率(IVCPD)均有显著提高作用(P0.05)：对玉米蛋白粉IVCPD有一定的提高作用。试验确定了酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和角蛋白酶对豆粕和玉米蛋白粉的最适添加剂量分别为：1.6、0.8、0.8、1.6 U/g底物和0.8、1.6、0.4、0.2 U/g底物。单独添加和结合使用蛋白酶对玉米+豆粕(7：3)组合底物的作用效果表明,单一添加酸性蛋白酶的作用效果最优,酸性蛋白酶+中性蛋白酶及酸性蛋白酶+碱性蛋白酶组合的作用效果与单独添加酸性蛋白酶无显著差异,且显著高于酸性蛋白酶+角蛋白酶组；单独添加中性蛋白酶、碱性蛋白酶和角蛋白酶无显著添加效果(P0.05)。说明蛋白酶对饲料原料的作用效果不仅与其底物类型有关,还与蛋白酶的种类和添加剂量有关；且酸性蛋白酶与其它蛋白酶结合使用无协同效应(P0.05)。3.影响蛋白酶作用效果关键因素的研究。在胃内pH条件下,除酸性蛋白酶外,3种蛋白酶活性均较低,约为最适酶活的10%；中(P0.05)、碱(P0.05)、角蛋白酶(P0.05)有不同程度的复性能力,角蛋白酶复性率达37.68%。分别从嗉囊和小肠阶段添加蛋白酶都显著提高了豆粕和玉米蛋白粉IVCPD(P0.05),且从嗉囊阶段添加的作用效果优于小肠段添加,提示蛋白酶对饲料原料的作用效果主要与其作用时间有关。仅在嗉囊段添加蛋白酶的作用结果显示,各蛋白酶在嗉囊段添加均提高了玉米蛋白粉和豆粕的IVCPD,且中性蛋白酶的作用效果优于其它各酶。说明嗉囊可能为蛋白酶发挥作用提供了一个较缓和的场所,且酸性蛋白酶的作用受到除pH外其他因素的影响。四种蛋白酶对内源性消化酶活性的影响结果表明,酸性蛋白酶可显著提高胰蛋白酶活性(P0.05)；中性蛋白酶对胰蛋白酶活性无显著影响(P0.05)；碱性蛋白酶和角蛋白酶可显著降低胰蛋白酶活性(P0.05)：而各蛋白酶对糜蛋白酶活性无显著影响(P0.05)。酸性蛋白酶可能通过提高胰蛋白酶活性发挥作用,而碱性蛋白酶和角蛋白酶可能会对蛋白质消化带来不利影响。4.最适添加剂量下的各蛋白酶单独及结合添加在肉仔鸡(31日龄)日粮中的应用研究。单独添加酸性蛋白酶可显著改善肉仔鸡(1-31日龄)平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)(P0.05),且酸性+中性蛋白酶及酸性+碱性蛋白酶组合的作用效果与单独添加酸性蛋白酶无显著差异(P0.05)；单独添加中、碱和角蛋白酶对31日龄肉仔鸡生长性能无显著影响(P0.05)。然而,蛋白酶的添加降低了肉仔鸡(31日龄)粗蛋白消化率(P0.05)；除Tyr和Pro,其他氨基酸消化率均有不同程度的降低。试验结果表明,蛋白酶的酶学性质决定其作用效果,且添加剂量及其对内源性消化酶活的关系均会影响其作用效果。本试验所建立的体外法可用于预测蛋白酶对肉仔鸡生长性能的作用效果,但无法预测对肉仔鸡粗蛋白消化率的影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S831.5

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 辛总秀;李军;;金属离子对饲用纤维素酶活性的影响[J];当代畜牧;2010年09期

2 黄瑞林,李铁军,谭支良,邢廷铣;透析管体外消化法测定饲料蛋白质消失率的适宜酶促反应条件研究[J];动物营养学报;1999年04期

3 李富伟,郑爱娟,蔡辉益;回肠末端食糜法测定肉鸡对小肽和游离氨基酸吸收率的研究[J];饲料工业;2003年10期

4 汤海鸥;汪勇;李富伟;;关于饲用酶制剂活性测定影响因素的分析[J];饲料工业;2007年24期

5 马俊孝;张景燕;刘玉庆;;体外法评价饲用木聚糖酶的研究[J];饲料工业;2009年04期

6 马俊孝;张景燕;孙作为;刘玉庆;;木聚糖酶、甘露聚糖酶体外酶解数据库的研究[J];饲料工业;2009年18期

7 付大波;訾乃涛;熊晓燕;周樱;;木聚糖酶对玉米、豆粕、小麦和菜粕体外消化率的影响[J];饲料工业;2013年04期

8 周梁;张海军;王晶;郑旭阳;齐广海;武书庚;;蛋白酶对8~21日龄肉仔鸡生长性能、氨基酸表观消化率及肠道组织形态的影响[J];动物营养学报;2014年05期

9 王爱娜;杨在宾;杨维仁;姜淑贞;;温度和pH值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性影响的研究[J];家畜生态学报;2006年03期

10 陈冬梅;陈明星;衣海龙;李静;;碱性蛋白酶水解玉米蛋白粉的研究[J];农产品加工(学刊);2011年04期

相关博士学位论文 前3条

1 张铁鹰;植酸酶体外消化评定技术的研究[D];中国农业科学院;2002年

2 赵峰;用酶法评定鸭饲料代谢能的方法学研究[D];中国农业科学院;2006年

3 王宁娟;饲用酶制剂生物学价值评价技术研究[D];中国农业科学院;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 赵华;复合酶制剂对肉鸡生产性能和养分利用率影响的研究[D];四川农业大学;2002年

2 侯小锋;非淀粉多糖酶制剂对肉仔鸡日粮能量代谢率的调控及其体外评定方法的研究[D];山西农业大学;2005年

3 吕刚;用蛋白酶体外酶解豆粕的酶解参数及饲喂效果研究[D];四川农业大学;2005年

4 付生慧;非淀粉多糖酶谱筛选及酶制剂对肉仔鸡日粮代谢能调控效应的研究[D];华中农业大学;2006年

5 张旭;玉米醇溶蛋白的制备及醇溶蛋白涂膜的应用[D];东北农业大学;2007年

6 戴晋军;酶制剂提高仔猪不同品质玉米日粮可消化性的体外及体内研究[D];华中农业大学;2007年

7 权文吉;酸性蛋白酶水解玉米蛋白粉的研究[D];大连理工大学;2007年

8 严念东;稻谷专用酶制剂的体外筛选及其在肉鸭稻谷型日粮中的应用[D];武汉工业学院;2008年

9 郑卫宽;用仿生消化仪测定棉粕鸭真代谢能值的研究[D];中国农业科学院;2009年

10 杜思刚;木聚糖酶的体外酶解筛选及其在肉仔鸡小麦日粮中的应用研究[D];河南农业大学;2009年

，

本文编号：1560356