酸枣仁皂苷对肉鸡下丘脑神经细胞采食相关基因表达影响的研究

发布时间：2018-03-11 07:17

  本文选题：酸枣仁皂苷　切入点：肉鸡　出处：《辽宁医学院》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的通过研究酸枣仁皂苷对下丘脑原代神经元细胞采食调控因子表达的影响,探明酸枣仁皂苷调节采食量的作用途径。揭示肉鸡饲粮中添加酸枣仁皂苷改善生产性能的作用机制。方法本实验所需种蛋和孵化条件由辽宁医学院家禽养殖团队提供。提取低胚龄鸡胚的下丘脑组织,分离神经元细胞培养并鉴定。取发育良好的下丘脑神经细胞,分别在培养液中添加不同浓度的酸枣仁皂苷、HSP70蛋白和CRH蛋白作为处理因子,在40.5℃高温下培养,用Real-time PCR和Western Blot的方法检测下丘脑神经细胞中NPY、Ag Rp、GABA A-α1、MC4R、POMC、CRH和HSP70基因的m RNA和蛋白表达量,应用SPSS软件进行统计分析,阐明应激对采食量调节因子的影响以及酸枣仁皂苷对其的调节作用。结果1.建立鸡下丘脑神经元细胞培养方法体系,并经鉴定证实所培养的细胞为下丘脑神经元细胞。2.经酸枣仁处理后NPY、GABA A-α1、MC4R和Ag Rp基因m RNA的相对表达量极显著的提高(P0.01),而POMC和CRH基因的m RNA相对表达量极显著降低(P0.01)。3.经HSP70处理后NPY和GABA A-α1m RNA的相对表达量极显著提高(P0.01),MC4R和CRH基因m RNA的相对表达量极显著降低(P0.01),Ag Rp m RNA表达量相对提高(P0.05),POMC m RNA表达量明显下降(P0.05)。4.经CRH处理后NPY、MC4R、POMC、CRH m RNA的相对表达量极显著提高(P0.01),Ag Rp m RNA的相对表达量极显著降低(P0.01)。5.用酸枣仁皂苷预处理后40.5℃培养,极显著低下丘脑神经元细胞NPY、POMC、GABA A-α1m RNA的相对表达量(P0.01),其他基因MC4R、Ag Rp和HSP70 m RNA的相对表达量有所提高(P0.01)。6.添加HSP70预处理后40.5℃培养,下丘脑神经元细胞中NPY、POMC基因的m RNA相对表达量极显著降低(P0.01),而GABA A-α1基因m RNA相对表达量有增高的趋势,Ag Rp、MC4R m RNA相对表达量与对照间差异不显著(P0.05)。7.39℃培养的下丘脑细胞样本,NPY m RNA相对表达量与POMC m RNA和HSP70 m RNA相对表达量正相关均呈显著正相关(r2=0.777,P=0.020;r2=0.806,P=0.0.015);40.5℃培养,MC4R m RNA相对表达量与POMC m RNA相对表达量呈显著负相关(r2=0.840,P=0.029)。结论1.获得鸡下丘脑神经元原代细胞培养的成熟技术。2.酸枣仁皂苷和HSP70蛋白可调控下丘脑神经元原代细胞采食相关基因的表达。3.CRH与40.5℃高温处理,下丘脑神经元细胞中NPY、POMC、GABA A-α1、MC4R、Ag Rp m RNA等基因的变化趋势相同,实验条件下CRH可替代高温处理。4.酸枣仁皂苷和HSP70均对40.5℃高温培养的下丘脑神经元原代细胞NPY、POMC、GABA A-α1、MC4R、Ag Rp等基因m RNA的表达量有恢复作用。5.NPY m RNA相对表达与POMC m RNA和HSP70 m RNA相对表达量呈显著正相关;MC4R m RNA相对表达量与POMC m RNA相对表达量呈显著负相关。
[Abstract]:Objective to study the effect of Zizyphylloside on the expression of intake regulatory factors in primary hypothalamic neurons. The effect of jujube seed saponins on regulating feed intake was explored. The mechanism of adding jujube seed saponin to broiler diet to improve production performance was revealed. Methods the conditions of egg breeding and hatching required in this experiment were obtained from poultry breeding team of Liaoning Medical College. Extraction of hypothalamic tissue from chicken embryos of low embryo age, The hypothalamic nerve cells were cultured at 40.5 鈩，

本文编号：1597122