猪圆环病毒2型Cap基因的原核表达及IgY多抗的制备

发布时间：2018-03-24 09:44

  本文选题：猪圆环病毒型　切入点：重组Cap蛋白　出处：《中国兽医科学》2017年06期

【摘要】：本试验将编码PCV2 Cap蛋白的基因克隆到pET-32a载体中,构建成重组质粒pET-32a-Cap,并转化到BL21宿主菌中进行诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定PCV2 Cap重组蛋白的表达情况,用Ni~+亲和柱纯化重组蛋白,并免疫产蛋鸡来制备抗Cap的多克隆抗体IgY,通过间接ELISA检测抗体滴度和抗Cap IgY抗体与PCV2的结合力。结果显示,Cap蛋白能在原核细胞中成功重组表达,蛋白主要以可溶性存在于细胞裂解液上清中,Ni~+柱纯化的重组蛋白经五次免疫产蛋鸡后卵黄抗体的滴度可达1∶64 000,所制备的IgY抗体与病毒和Cap蛋白的结合力较高。上述结果为研制检测PCV2 Cap蛋白试剂盒奠定了基础。
[Abstract]:In this experiment, the gene encoding PCV2 Cap protein was cloned into pET-32a vector, and the recombinant plasmid pET-32a-Cap. was constructed, and transformed into BL21 host strain to induce expression. The expression of PCV2 Cap recombinant protein was identified by SDS-PAGE, and the recombinant protein was purified by Ni-affinity column. The polyclonal antibody against Cap was prepared by immunizing laying hens. The titer of antibody and the binding force of Cap IgY antibody to PCV2 were detected by indirect ELISA. The results showed that the captophan protein could be successfully expressed in prokaryotic cells. The yolk antibody titer of the recombinant protein, mainly soluble in the supernatant of cell lysate, was up to 1:64 000 after five times immunization, and the IgY antibody had higher binding power with virus and Cap protein. The results laid a foundation for the development of PCV2 Cap protein kit.
【作者单位】： 西北农林科技大学动物医学院;
【基金】：陕西省国际科技合作基地建设项目(2015SD0018)
【分类号】：S852.651

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