地克珠利对柔嫩艾美耳球虫SAG4表达的影响

发布时间：2018-03-26 22:32

  本文选题：地克珠利　切入点：柔嫩艾美耳球虫　出处：《中国兽医科学》2017年07期

【摘要】：建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫感染鸡动物模型,收集获得柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子,采用PCR扩增柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因不含N端信号肽的编码序列,构建p ET-28a-SAG4表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备SAG4抗血清。用Real-time PCR检测SAG4 m RNA的表达,用Western-blot和免疫荧光技术检测SAG4蛋白的表达情况。结果显示,p ET-28a-SAG4表达的重组蛋白为可溶性蛋白,地克珠利显著降低了柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因m RNA和蛋白的表达。这提示SAG4基因可能与地克珠利抗球虫作用相关,这将为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供理论依据。
[Abstract]:A chicken model of resistance to Eimeria tenella infection was established. The second generation merozoite of Eimeria tenella was collected and amplified by PCR. The SAG4 gene of the second generation of Eimeria tenella was amplified without N-terminal signal peptide. The expression plasmid of p ET-28a-SAG4 was constructed and transformed into BL21DDE3) competent cells. The fusion protein was induced by IPTG and purified by nickel affinity chromatography. The antiserum of SAG4 was prepared by immunizing BALB/c mice. The expression of SAG4 m RNA was detected by Real-time PCR. Western-blot and immunofluorescence techniques were used to detect the expression of SAG4 protein. The results showed that the recombinant protein expressed by ET-28a-SAG4 was soluble protein. The expression of m RNA and protein in the second generation of merozoite of Eimeria tenella was significantly reduced by Dikjul, which suggested that the SAG4 gene might be related to the anti-coccidiosis effect of Dichulide. This will provide a theoretical basis for the exposition of the anti-coccidiosis mechanism.
【作者单位】： 河南科技大学动物科技学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31472238,31101855)
【分类号】：S852.723

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