miR-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的调控

发布时间：2018-03-27 14:18

本文选题：奶山羊乳腺上皮细胞　切入点：泌乳　出处：《东北农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：具有泌乳功能的乳腺是哺乳动物的特殊腺体。为了提高奶山羊的泌乳量,研究者们在分子生物学的基础上对乳腺进行了大量的研究。mi RNA是一类长度约为18~25个核苷酸组成的单链非编码RNA,大量存在于在人类和哺乳动物的细胞中并发挥着重要的调节作用。本研究以奶山羊乳腺上皮细胞中的mi R-142-3p为研究对象,通过使用mi Rbase数据库对mi R-142-3p靶位点预测发现,mi R-142-3p以不完全配对的方式结合于催乳素受体(PRLR)3’UTR区域即它们之间存在靶向关系,所以推测mi R-142-3p可能与奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能密切相关。本研究旨在通过mi R-142-3p基因过表达与抑制,进一步研究mi R-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳调节作用。本研究利用脂质体载体向奶山羊乳腺上皮细胞中转染mi R-142-3p mimics和mi R-142-3p inhibitor并作用48h,进而研究mi R-142-3p对奶山羊乳腺上皮泌乳功能的调控作用。应用q RT-PCR检测技术检测Prlr及其相关通路基因的变化;利用Western blotting方法检测mi R-142-3p对PRLR等泌乳相关通路蛋白的影响;利用免疫荧光检测PRLR在奶山羊乳腺上皮细胞中的定位及表达;应用EDU法检测奶山羊乳腺上皮细胞增殖;应用流式检测法检测奶山羊乳腺上皮细胞周期及凋亡;使用CCK试剂盒检测奶山羊乳腺上皮细胞活力的变化。同时收集作用48h后的培养液,应用TG试剂盒检测奶山羊乳腺上皮细胞甘油三酯的分泌的变化及乳糖试剂盒检测其分泌乳糖的变化情况。实验结果表明:①应用q RT-PCR方法分别检测过表达及抑制mi R-142-3p时mi R-142-3p与靶基因Prlr的变化,mi R-142-3p过表达,mi R-142-3p表达量升高,Prlr下调;mi R-142-3p抑制,mi R-142-3p表达量降低,Prlr上调。②Western blotting技术检测结果显示,mi R-142-3p过表达时,奶山羊乳腺上皮细胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表达量均下降;mi R-142-3p抑制时,奶山羊乳腺上皮细胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表达均升高;过表达及抑制时,GLUT1均表达变化不显著。③利用免疫荧光结果显示,mi R-142-3p在细胞水平调控PRLR位置,并使PRLR表达水平降低。④应用EDU法检测奶山羊乳腺上皮细胞增殖,结果显示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮细胞增殖。⑤流式细胞检测法检测奶山羊乳腺上皮细胞周期及凋亡,发现mi R-142-3p可抑制细胞周期,促进细胞凋亡。⑥使用CCK法检测奶山羊乳腺上皮细胞活力的变化,结果显示mi R-142-3p可抑制细胞活力。⑦采用TG试剂盒及乳糖试剂盒分别检测奶山羊乳腺上皮细胞分泌甘油三酯及乳糖的变化情况,结果显示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮细胞甘油三酯的生物合成,但对乳糖分泌无显著影响。综上所述,mi R-142-3p通过抑制PRLR的表达,下调泌乳信号相关通路蛋白,从而抑制乳腺上皮奶山羊乳腺上皮细胞的增殖和活力,促进细胞凋亡,并对奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳功能具有负向调节作用。
[Abstract]:In order to improve the lactation amount of breast epithelial cells of dairy goats , the effects of mi R - 142 - p on the lactation function of breast epithelial cells of milk goats were investigated by using the method of Western blotting . The results showed that mi R - 142 - p could inhibit the proliferation of mammary epithelial cells of dairy goats . The results showed that mi R - 142 - p could inhibit the proliferation of mammary epithelial cells of milk goats .

【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S827

【参考文献】