表没食子儿茶素没食子酸酯对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良的影响

发布时间：2018-03-28 18:40

  本文选题：儿茶素　切入点：福美双　出处：《华中农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)是伴随着肉鸡过快生长而发生的一种骨骼性疾病,主要病理学特征是病鸡胫骨近端干骺面生长板内出现无血管化亦不能钙化的白色软骨栓。TD的发生一方面是由于肉鸡胫骨软骨生长板血管生成受阻,肥大区血管浸润减少,无法带来成骨细胞、破骨细胞和间充质干细胞以及细胞所需的营养成分,导致钙化区软骨无法完成骨沉积过程,最终形成白色的软骨栓。另一方面,TD的发生伴随着大量软骨细胞损伤,细胞增殖、分化过程异常,蛋白分泌功能受到破坏,导致软骨细胞外基质(ECM)降解速率下降,无法为后期骨沉积准备构建出充足的空间结构。综合同行和本实验室研究成果,我们发现热休克蛋白家族(HSPs)成员Hsp-90在介导肉鸡TD发生过程中起到非常关键的作用。在哺乳动物,Hsp-90被发现可以促进血管生成,加速骨骼发育。而在禽类,Hsp-90表达量的上升会抑制血管的生成,起到与哺乳动物相反的生理功能。研究发现,肉鸡TD发生过程中胫骨生长板软骨细胞Hsp-90表达量显著增加,同时肥大区软骨内毛细血管生成减少,延伸受阻,软骨细胞经历缺氧、蛋白分泌异常等症状。对TD肉鸡注射Hsp-90特异性抑制剂17-DMAG能明显减轻TD症状,胫骨血管生成增加,延伸得到恢复。Hsp-90对禽类血管生成的抑制可能与其对软骨细胞的细胞因子分泌调控有关,但调控机制尚不完全清楚。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶提取物中含量最高的一种多酚,可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡。另外,EGCG还可以通过调控HSPs及其客户蛋白表达,抑制肿瘤生长。作为一种重要的Hsp-90抑制剂,通过注射EGCG治疗肉鸡TD具有很好的科学依据和可行性,而目前还没有任何关于EGCG对TD作用效果和机制的研究。本研究查阅大量文献,通过福美双诱导方式建立肉鸡TD模型,并在肉鸡TD发生前和过程中分别给与EGCG干预,观察EGCG对TD的预防和治疗效果。试验检测EGCG干预前后软骨细胞Hsp-90基因、蛋白表达水平,探究EGCG对TD肉鸡软骨细胞Hsp-90表达的调控效果。试验同时通过检测软骨细胞内与血管生成关系密切的细胞因子血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1基因的表达水平,进一步揭示EGCG通过调控Hsp-90表达影响软骨血管生成的作用机制,为研究EGCG治疗TD提供有力的依据。试验具体得到如下结论:1.EGCG对福美双诱导的TD肉鸡生长性能及GP形态学影响饲料中添加福美双方式诱发的TD肉鸡表现精神萎靡、食欲不佳、体重下降、站立困难、行走能力丧失和骨骼发育畸形等。TD肉鸡病理剖检症状典型,与自然发生的TD症状相同。病鸡GP纵切面可见一片白色透明、无血管亦不能钙化的软骨栓。EGCG预防组和EGCG治疗组肉鸡精神状态良好,食欲增强,体重增加,具有一定的自由行走能力。纵切GP可见白色透明的软骨栓明显减小,说明EGCG对肉鸡TD具有一定的预防和治疗作用。2.EGCG对福美双诱导的TD肉鸡软骨组织病理学影响纵向切割各组肉鸡胫骨GP后做HE染色,相比对照组,TD发生组肉鸡胫骨GP增殖区软骨细胞分化异常,血管生成减少、延伸受阻。EGCG预防组和EGCG治疗组肉鸡胫骨GP软骨细胞分化正常,血管生成增加,并向软骨细胞增殖区深处延伸。3.EGCG对福美双诱导的TD肉鸡体内相关酶活力的影响试验对EGCG处理前后TD肉鸡血清中碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)以及肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活力水平进行检测,这些指标均能在一定程度上反映肝功能代谢情况。结果显示,相比于对照组肉鸡,TD发生组肉鸡中SOD、ALP活力显著降低(P0.05),AST水平明显上升(P0.05)。相比于TD发生组肉鸡,EGCG预防组和EGCG治疗组肉鸡中SOD、ALP活性均呈现不同程度的升高(P0.05),AST浓度也下降至正常值水平。以上结果说明EGCG对肉鸡TD导致的肝功能损伤具有一定的改善作用。4.EGCG对福美双诱导的TD肉鸡软骨GP细胞中Hsp-90、VEGF、Flk-1基因表达水平的影响试验对EGCG处理前后TD肉鸡胫骨GP细胞中Hsp-90、VEGF、Flk-1基因转录水平进行分析,以分析EGCG对TD肉鸡血管生成能力改变的作用机制。荧光定量PCR检测发现,TD发生组肉鸡GP软骨细胞Hsp-90、VEGF基因转录水平均显著上升,分别达到对照组水平的5.5倍(P0.05)和8倍(P0.05)。相对于TD发生组,EGCG预防组和EGCG治疗组肉鸡GP软骨细胞Hsp-90、VEGF基因表达水平出现明显下降,甚至低于对照组水平。相对于对照组,TD发生组肉鸡Flk-1基因表达量出现一定程度的下降;给予EGCG后,Flk-1基因表达水平得到明显恢复。说明EGCG可以通过影响与血管生成相关的细胞因子调控TD肉鸡软骨细胞生成和浸润。5.EGCG对肉鸡胫骨软骨生长板细胞中Hsp-90蛋白表达量的影响试验对EGCG处理前后TD肉鸡胫骨GP细胞中Hsp-90蛋白进行免疫印迹分析。结果显示,TD发生组肉鸡GP软骨细胞Hsp-90蛋白表达量显著高于对照组;EGCG处理后,EGCG预防组和EGCG治疗组肉鸡GP软骨细胞Hsp-90蛋白表达量均出现明显的下降,甚至低于对照组。
[Abstract]:鑲夐浮鑳�楠ㄨ蒋楠ㄥ彂鑲蹭笉鑹�(Tibial Dyschondroplasia,TD)鏄�浼撮殢鐫�鑲夐浮杩囧揩鐢熼暱鑰屽彂鐢熺殑涓，

本文编号：1677560