硼对猪卵泡颗粒细胞的影响及其在提高动物繁殖性能中的应用

发布时间：2018-03-28 23:20

本文选题：硼　切入点：猪卵泡颗粒细胞　出处：《安徽科技学院》2017年硕士论文

【摘要】：为探究硼对猪卵泡颗粒细胞的影响及其应用于动物生产以提高动物繁殖性能的可能性。本研究首先选用性成熟健康母猪卵巢,分离培养卵泡颗粒细胞,CCK-8毒性试验初步确定体外硼添加梯度为0、0.5、1.0、5.0、40和80 mmol/L。然后分别通过HE染色、流式细胞术、Western Blot、免疫荧光等方法进行细胞鉴定和相关指标检测。其次,试验选用96只健康性成熟小鼠,随机分为4组,饮水中硼添加量分别为0、5、10、20 mg/L,饲喂30 d后人工配种,分别于妊娠0d、14 d每组随机选取小鼠8只,处死后立即解剖取卵巢、子宫,称重,多聚甲醛固定;每组余下8只小鼠饲喂至产仔,观察并检测繁殖性能相关指标。试验结果如下:1、硼对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响:与0 mmol/L硼处理组相比较,0.5 mmol/L硼处理组猪卵泡颗粒细胞正常细胞比率升高5.3%,凋亡细胞比率降低5.7%;5.0、40和80 mmol/L硼处理组正常细胞比率分别降低6.7%、14.45%、15.01%,凋亡细胞比率分别增加5.7%、11.6%、14.8%。2、硼对猪卵泡颗粒细胞周期的影响:与0mmol/L硼处理组相比较,0.5和5.0 mmol/L硼处理组G1/G0细胞数降低,细胞比率分别降低3.77%和2.72%,G2/M期细胞比率及细胞增殖指数升高,G2/M期细胞比率分别升高1.13%、1.57%,细胞增殖指数分别升高1.75%、2.63%;1.0 mmol/L硼处理组G1/G0细胞比率降低10.48%,S期细胞比率及细胞增殖指数分别升高5.65%、4.53%;40 mmol/L硼处理组G2/M细胞比率及细胞增殖指数分别降低4.39%、2.97%;80 mmol/L硼处理组G1/G0细胞比率升高6.65%,S期、细胞比率、G2/M细胞比率及细胞增殖指数分别降低 3.93%、5.5%、9.43%。3、硼对G-1和G-15处理的猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响:与不用G-1与G-15处理组相似,低浓度硼对猪卵泡颗粒细胞凋亡有抑制作用,高浓度硼(硼添加量高于5.0mmol/L)则有促进作用,细胞死亡数增多。G-1处理组凋亡细胞比率均低于非处理组,表明G-1对猪卵泡颗粒细胞凋亡有抑制作用;G-15处理组凋亡细胞比率皆高于非处理组,表明G-15对猪卵泡颗粒细胞凋亡有促进作用。4、硼对G-1和G-15处理的猪卵泡颗粒细胞周期的影响:与不用G-1与G-15处理组相似,低浓度硼对G-1和G-15处理的卵泡颗粒细胞增殖有促进作用,硼添加浓度高于5.0 mmol/L时,对卵泡颗粒细胞增殖有抑制作用。与未添加G-1试验相比较,添加G-1处理组的S期细胞数及比率普遍降低。与未添加G-15试验相比较,G-15处理的低浓度硼组S期细胞数及比率降低,G2/M细胞数比率升高。5、硼对小鼠繁殖性能的影响:与同日龄0mg/L硼添加组相比较,5、10和20 mg/L硼添加组小鼠胎产仔数分别显著升高3.83、3.16、4.33只(P0.05),初生重分别显著降低0.26、0.44、0.46 g(P0.05);小鼠初生窝重变化无统计学意义(P0.05)。6、硼对小鼠卵巢组织结构的影响:与同日龄0mg/L硼添加组比较,妊娠7 d时卵巢皮质内卵泡数随硼添加量增加呈现先升高后降低趋势,10和20 mg/L硼添加组卵泡数显著升高(P0.05),原始卵泡减少,次级卵泡数量增多,初级卵母细胞核大而圆,可见少量闭锁卵泡;5、10和20 mg/L硼添加组卵巢指数随硼添加量增加呈现降低趋势,但差异不显著(P0.05);妊娠14d时,卵巢皮质内各级卵泡结构正常,次级卵泡数量增多,10 mg/L硼添加组卵泡数有所增加,但差异不显著(P0.05),20 mg/L硼添加组卵泡数显著降低(P0.05),闭锁卵泡数较妊娠7 d明显增加;5、10和20 mg/L硼添加组卵巢指数随硼添加量增加呈现先升高后降低趋势,但无统计学意义(P0.05)。7、硼对小鼠子宫组织结构的影响:各处理组子宫结构层次分明,未见明显病理性变化。与同日龄0 mg/L硼添加组相比较,妊娠7 d时,5、10和20 mg/L硼添加组子宫指数有所升高,但差异不显著(P0.05);5和20 mg/L硼添加组子宫壁厚度显著升高(P0.05);妊娠14 d时,子宫指数明显高于妊娠7 d,5、10和20mg/L硼添加组子宫指数显著升高(P0.05),5mg/L硼添加组子宫壁厚度显著升高(P0.05),20 mg/L硼添加组子宫壁厚度显著降低(P0.05);妊娠14 d子宫内膜较厚,且均明显高于妊娠7 d的子宫壁厚度。综上所述,低剂量硼(≤5.0 mmol/L硼)可调节体外培养猪卵泡颗粒细胞周期,促进卵泡颗粒细胞增殖能力;高剂量硼(≥5.0 mmol/L硼)则可加速卵泡颗粒细胞的凋亡,并表现出明显剂量依赖性。GPR30激动剂G-1组细胞凋亡呈缓解趋势,增殖系数呈升高趋势;GPR30特异性阻断剂G-15组细胞凋亡呈增强趋势,增殖系数呈降低趋势,表明硼可通过GPR30-GPER1通路来调控卵泡颗粒细胞的增殖与凋亡。5-20 mg/L饮水硼提高小鼠胎产仔数,降低初生重,但对初生窝重、卵巢和子宫指数无明显影响;5、10 mg/L饮水硼促进各级卵泡数增加,改善卵巢皮质内卵泡及子宫腺发育,其中以添加5mg/L硼效果最为明显;妊娠14d时子宫指数和子宫壁厚度明显高于妊娠7 d。
[Abstract]:In order to explore the effect of boron on porcine follicular granular cells and its application in animal production to improve the reproductive performance of pigs . The results were as follows : 1 . The effects of boron on the apoptosis of porcine follicular granulose cells were determined by HE staining , flow cytometry , Western Blot and immunofluorescence . The results were as follows : 1 . The percentage of normal cells in the treated group was decreased by 5.7 % , 14.45 % , 14.8 % , respectively . The percentage of G1 / G0 cells increased by 5.65 % , 4.53 % , 9.43 % and 3.93 % , 4.53 % and 9.43 % respectively . The number of follicles in the ovary cortex increased significantly ( P0.05 ) , the number of follicles in the ovarian cortex increased significantly ( P0.05 ) , the number of follicles in the 5 , 10 and 20 mg / L boron groups increased significantly ( P0.05 ) , the number of follicles in the 5 , 10 and 20 mg / L boron groups increased significantly ( P0.05 ) . The results showed that boron could regulate the proliferation and apoptosis of the follicle cells through the GPER1 pathway . 5 - 20 mg / L boron could increase the litter size and reduce the initial weight , but it had no obvious effect on the primary nest weight , ovary and uterus index ; 5 , 10 mg / L water boron promoted the growth of follicles in the ovary cortex and the uterine gland development .

【学位授予单位】：安徽科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S814

【参考文献】