牛源犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒的构建及鉴定

发布时间：2018-03-31 00:22

  本文选题：牛源犬新孢子虫　切入点：NcAMA基因　出处：《中国兽医学报》2017年02期

【摘要】：PCR扩增牛源犬新孢子虫NcAMA1基因,克隆至pMD18-T simple载体;将鉴定正确的NcAMA1基因亚克隆至pCR259腺病毒穿梭载体,构建重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcAMA1;依次转化HighQ-1Transpose-AdTM294和HighQ-1TM感受态细胞,构建NcAMA1基因重组腺病毒表达质粒T294-NcAMA1;PacⅠ酶线性化后,脂质体介导转染至QBI-HEK293细胞,包装Ad5-NcAMA1重组腺病毒。结果表明,获得Ad5-NcAMA1重组腺病毒滴度为5.6×109 TCID50/mL;经PCR检测到重组腺病毒NcAMA1基因;经IFAT和Western blot检测NcAMA1基因在QBIHEK293细胞中获得表达,表达蛋白相对分子质量为68 000,具有较好的反应原性。本试验成功构建了Ad5-NcAMA1重组腺病毒,为牛源犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定基础。
[Abstract]:The recombinant adenovirus was cloned into pCR259 adenovirus shuttle vector to construct recombinant adenovirus shuttle plasmid pCR259 - Nc@@

【作者单位】： 延边大学农学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31160501,31360605) 吉林省重点科技攻关资助项目(20140204078NY) 吉林省教育厅重点资助项目(吉教科合字[2015]第1号) 吉林省自然科学基金资助项目(20160101201JC)
【分类号】：S852.7

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本文编号：1688321