J亚群禽白血病病毒嵌合多表位基因酿酒酵母表面展示

发布时间：2018-04-03 00:21

  本文选题：J亚群禽白血病病毒　切入点：多表位疫苗　出处：《山东农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：禽白血病(Avian Leukosis,AL)是指由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转录病毒引起的以禽类造血组织中某些细胞成分过度增生为主的各种具有传染性的肿瘤性疾病,是世界性分布的禽肿瘤性传染病,严重制约养禽业发展的重要疫病之一。自1911年发现以来,ALV(Avian Leukosis Virus)成为研究肿瘤性传染病发病机理的重要模型,针对它的研究一直受到各国科学家的重视。由于该病毒涵盖多种亚群,同一亚群又有不同毒株,以及相关的内源性病毒的广泛存在,造成本病的防控难度大大增加。西方发达国家由于养殖模式和管理方式等方面的优势,通过几十年的努力,对规模化养殖场ALV的感染基本实现了净化。但是,近年来,ALV-J(J亚群禽白血病病毒)在我国的发生和蔓延却呈现愈演愈烈的情形,不断有我国白羽鸡群和地方种鸡发生ALV-J感染的报道,ALV-J感染的发病日龄也呈现提前的趋势,并且首次发现了急性致瘤性ALV-J引发急性纤维肉瘤的自然感染的病例。ALV-J对我国禽业发展已造成严重威胁,针对规模化鸡场进行ALV的净化已成为我国养禽业当前的重要任务,但是,由于我国地缘辽阔、鸡群品系繁多、养殖条件参差不齐等原因,实现ALV全面的净化任重道远。许多学者尝试从分子生物学的角度研发ALV的疫苗降低ALV在鸡群的感染率,以期加速ALV的净化脚步。多表位疫苗(Multi-epitope Vaccine)是利用分子生物学和计算机科学分析、筛选、获取目标抗原中的优秀抗原表位,将多个理想的抗原表位优化并串联研制出的一种新型疫苗。这种疫苗尤其适用于基因容易突变或者基因组中存在癌基因的病毒,如人类免疫缺陷病毒(HIV)、禽白血病病毒(ALV)。通过分析并获得这些病毒的抗原性和保守性都比较强的抗原表位研制多表位疫苗是攻克这些肿瘤疾病的重要方向。酿酒酵母表面展示系统(Saccharomyces Cerevisiae Surface Display System)作为一种真核表达系统,越来越受到关注,在抗原抗体筛选、蛋白定向进化、水体净化和活载体疫苗等方面得到广泛的应用。相比大肠杆菌、沙门氏菌等,酿酒酵母被公认为是安全无毒(GRAS,Generally Recognized as Safe)的食品级工业菌,广泛用于食品发酵、制药工程和畜禽饲料等领域,酵母的真核表达系统的翻译后修饰比细菌更具优势。本研究主要是利用酵母表面展示系统和多表位疫苗相关技术,通过已发表的关于ALV-J病毒结构的研究结果和生物信息软件等筛选出ALV-J中保守性和抗原性较好的表位基因Gag(278 376aa),Pol(784 855aa),Env(Gp85:145 156aa和Gp37:412 538aa)片段串联为多表位基因X,使用EBY100/pCTCON2酵母表面展示系统,构建了ALV-J嵌合多表位基因酿酒酵母表面展示载体EBY100/pCTCON2-X,并对嵌合多表位基因X在酵母细胞表面的表达情况进行了检测。结果表明,本研究成功构建了ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示载体,经过诱导表达,在酵母细胞表面成功展示了ALV-嵌合多表位基因的蛋白。通过对诱导条件的优化,我们发现EBY100/pCTCON2-X在诱导后第24h,ALV-J嵌合多表位基因表达程度最高,表达效率约为35%,最高达到50%。本研究构建的ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示载体为后续针对ALV-J的酿酒酵母活载体疫苗的研究奠定了基础。
[Abstract]:Avian leukosis ( ALV - J ) is one of the most important infectious diseases in poultry industry . Generally Recognized as Safe)鐨勯�熷搧绾у伐涓氳彛�

本文编号：1702792