猪ISG15基因的克隆表达与多克隆抗体的制备

发布时间：2018-04-03 15:24

  本文选题：猪　切入点：ISG基因　出处：《中国兽医科学》2017年03期

【摘要】：本研究从家猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出家猪ISG 15基因,经测序和序列分析,将ISG 15片段与p ET28a质粒连接,构建重组原核表达载体p ET28a-ISG15;经IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,以获得ISG15蛋白。用纯化的ISG15蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果显示,家猪ISG 15基因CD S区长504 bp,编码167个氨基酸,包括两个泛素样结构域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列为LRLRGG;W estern-blot分析表明重组ISG15蛋白的免疫原性良好;经ELISA测定血清中抗体的效价为1∶102 400。上述研究结果为进一步揭示家猪ISG15蛋白的功能奠定了基础。
[Abstract]:In this study, total RNAs were extracted from peripheral blood lymphocytes of domestic pigs. ISG 15 gene of domestic pigs was cloned by RT-PCR. After sequencing and sequence analysis, the recombinant prokaryotic expression vector pET28a-ISG15 was constructed by ligating the ISG 15 fragment with p ET28a plasmid, which was induced by IPTG.ISG15 protein was purified by Ni column.Rabbits were immunized with purified ISG15 protein to prepare polyclonal antibodies.The results showed that the length of CD S region of ISG 15 gene in domestic pigs was 504 BP, encoding 167 amino acids.The amino acid peptide of the N-terminal of two Ubiquiquiform domains, the N-terminal of Ubiquiquitin, and the amino acid peptide at the C-terminal of 81n, 156) and the conserved sequence of the C-terminal were LRLRGGGG W estern-blot analysis showed that the immunogenicity of the recombinant ISG15 protein was good, and the titer of antibody in serum determined by ELISA was 1102: 400.The results laid a foundation for further revealing the function of ISG15 protein in domestic pigs.
【作者单位】： 河南农业大学牧医工程学院;
【基金】：河南省高校科技创新人才支持计划项目(14HASTIT022) 国家自然科学基金资助项目(31272567) 河南省高校科技创新团队支持计划资助项目(14IRTSTHN015)
【分类号】：S828

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本文编号：1705777