基于LC-MS的当归不同炮制品挥发油抗大鼠足肿胀炎症的代谢组学研究

发布时间：2018-04-04 19:43

本文选题：当归挥发油　切入点：不同炮制品　出处：《甘肃农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：以LC-Q/TOF-MS为分析平台,通过建立角叉菜胶致大鼠足肿胀急性炎症模型,分别用当归炭挥发油(C-VOAS)、酒当归挥发油(J-VOAS)、土当归挥发油(T-VOAS)和油当归挥发油(Y-VOAS)进行干预,对当归挥发油抗炎作用进行评价。研究以大鼠的血浆和炎性浸出液为生物样本,就生物样本的预处理方法和色谱分离条件进行探讨,并用质量控制(Quality control,QC)样本对样品的分析方法进行评价。然后采用代谢组学研究策略,探讨当归挥发油的抗炎机制,采用SIMCA-P 13.0分析软件,筛选差异代谢物,并构建差异性代谢物的代谢途径,研究当归不同炮制品挥发油对角叉菜胶致大鼠足肿胀炎症的抗炎作用,从整体代谢水平上,考察当归不同炮制品挥发油对角叉菜胶致大鼠足肿胀炎症的抗炎作用机理,为解决中药的整体效应和物质基础提供新思路和新方法。主要研究结论如下:1采用LC-Q/TOF-MS分析平台,对血浆和炎性浸出液等样品预处理方法进行选择,并对色谱分离条件进行优化,结果表明,采用甲醇进行脱蛋白处理,更适合样本的LC-Q/TOF-MS测定,色谱分离条件为:流速为0.4 mL/min;柱温为35°C;流动相组成A:超纯水(含0.1%甲酸),B:乙腈(含0.1%甲酸);梯度洗脱程为:0-1min为5%B,1-6min由5%B线性变化到20%B,6-9min由20%B线性变化到50%B,9-13min由50%B线性变化到95%B,13-15min保持为95%B。进样量为4μL,自动进样器温度为4℃。利用QC样本,对已经确定的样品预处理方法和色谱分离条件进行评价,结果表明,血浆和炎性浸出液的QC样本组分均得到了良好的分离,峰形对称,基线稳定;在正离子检测模式下,血浆和炎性浸出液样品组分平均检出率经计算为93.628%和90.1535%,相对标准偏差RSD为5.784%和2.197%;在负离子检测模式下,血浆和炎性浸出液样品组分平均检出率经计算为95.628%和90.2981%,相对标准偏差RSD为4.162%和6.4708%。这表明所选择的色谱分离条件可以有效地使血浆和炎性浸出液等目标样品的组分得到分离,分析平台重复性良好,可以用于对实验中所有样品的分析,所得数据也可以用于代谢组学的进一步多维统计分析。2采用LC-Q/TOF-MS测定空白对照组(Control)、炎症模型组(Model)、当归炭挥发油组(C-VOAS)、酒当归挥发油组(J-VOAS)、土当归挥发油组(T-VOAS)和油当归挥发油组(Y-VOAS)的血浆和炎性浸出液中代谢物,分别从血浆和炎性浸出液鉴定和推测出34、34种代谢物。采用主成分分析法和正交偏最小二乘法判别分析法对血浆和炎性浸出液进行分析,发现Control、Model完全分离,C-VOAS、J-VOAS、T-VOAS和Y-VOAS靠近对照组,表明急性炎症模型复制成功,且C-VOAS、J-VOAS、T-VOAS和Y-VOAS对角叉菜胶致大鼠足肿胀急性炎症模型的炎症反应具有一定的作用,呈现恢复到正常状态的趋势。根据变量重要性投影(variable importance for theprojection)、结合T-test结果筛选差异代谢物,发现C-VOAS潜在的药理效应比较明显,可以使多个差异代谢物回调到正常状态。利用代谢组学途径分析(Metabolomics Pathway Analysis,MetPA)数据库,对差异代谢物的代谢途径进行分析。3通过整合的研究的思路,将血浆和炎性浸出液中分析得到的差异性代谢物进行整合,总共得到42种差异性代谢物,并将差异性代谢物输入MetPA数据库,构建相应的代谢通路,进一步就当归挥发油干预大鼠角叉菜胶急性炎症模型的机制进行分析研究,从而为此类研究提供更完整、更系统的理论依据。分析结果表明,当归挥发油可以通过调节三羧酸循环、提高葡萄糖含量、使脂肪酸代谢紊乱恢复而达到抗炎作用,当归挥发油能回调变化的代谢物,结合对角叉菜胶所致炎症的发生机制的推测,认为筛选的差异性代谢物中花生四烯酸、琥珀酸、丙酮酸、葡萄糖、硬脂酸、苹果酸具有生物学意义,可以作为角叉菜胶致炎及当归挥发油抗炎的生物标志物,并且当归炭挥发油对大鼠角叉菜胶急性炎症模型的干预效果最佳。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S853.7

【共引文献】