鸡温敏TRP离子通道蛋白的组织分布及功能初探

发布时间：2018-04-06 21:40

本文选题：瞬时感受器电位　切入点：下丘脑　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：在哺乳动物上,瞬时感受器电位(TRP)离子通道蛋白响应环境温度变化,介导温度感觉形成。因脊椎动物进化缘故,家禽TRP蛋白的种类和结构与哺乳动物明显不同。本研究通过测定鸡温敏TRP蛋白的组织分布和种间差异,探析下丘脑TRP蛋白表达与肉鸡体温发育的相关性,阐释TRP蛋白在热应激、免疫应激条件下对鸡胚肠上皮细胞炎症反应的调控作用,进一步明确鸡温敏TRP蛋白在中枢和外周组织的生理功能,为家禽体热及免疫调节提供新靶点、新思路。试验一研究鸡温敏TRP蛋白的组织分布和品种表达差异。以体型有差异的农大3号蛋鸡和海兰褐蛋鸡为研究对象,分别采取下丘脑、海马、肝脏、心脏、肺脏、肾脏、小肠、输卵管、卵巢组织。通过荧光定量PCR方法检测6种温敏TRP离子通道在各个组织的表达量,并通过免疫组化进行组织定位和定量。结果显示,在蛋鸡体内主要表达的温敏TRP离子通道蛋白有:TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPA1、TRPM8五种,TRPV4通道的表达量极低,几乎没有。总体来看,TRP通道在下丘脑和海马的表达量较高且集中分布于神经元,6种通道中的TRPV3表达量相对较高。在一些组织中,TRPV1、TRPV2、TRPA1和TRPM8的表达都存在品种间的差异。试验二研究肉鸡下丘脑TRP蛋白表达的发育规律及与体温的关联。选取1日龄肉鸡,常规饲养,每周挑选体温差异大的个体,分为高体温和低体温两组,每组8只。屠宰,取下丘脑组织,检测TRPV2和TRPV3离子通道的蛋白表达量。结果显示,肉鸡的体温随生长发育逐渐升高,个体体温差异逐渐缩小。TRPV3离子通道在不同日龄的表达存在显著差异。在肉鸡发育早期和末期,TRPV2和TRPV3通道蛋白的表达与体温高低呈现出了一致性,即体温高的表达量高,反之亦然。试验三研究TRP蛋白在热应激、免疫应激介导鸡胚肠上皮细胞炎症反应中的作用。试验分两部分:(1)一方面培养鸡胚肠上皮细胞,随机分为3组(每组6个重复),分别置于34、40和43oC孵育1 h,提取总蛋白。另一方面,培养鸡胚肠上皮细胞,随机分为3组(每组6个重复),分别为对照组(37oC培养)、高温组(43oC培养)和高温+TRP抑制剂组(43oC培养+钌红)。钌红提前1小时加入,各温度处理时间为1 h,提取细胞总RNA,检测促炎因子TNF-α、IL-1和抑炎因子IL-10的表达量。结果显示,促炎因子在高温组的表达量高于另外两组,抑炎因子在高温组的表达量低于另外两组。TNF-α和IL-1在高温组的表达量显著高于高温+TRP抑制剂组(P0.05)。(2)培养鸡胚肠上皮细胞,随机分为4组,分别为对照组(加生理盐水)、脂多糖组(LPS,0.5μg/m L,2 h)、TRP离子通道蛋白抑制剂组(钌红,10μmol/L,3 h)和LPS+TRP抑制剂组(先加入钌红孵育1 h后,再加入LPS孵育2 h),每组6个重复。细胞经上述处理后,提取总RNA,测定TRP离子通道蛋白和炎性因子的基因表达。结果表明,LPS处理后,TRPV1与TRPV3的表达量显著低于对照组,IL-1和IL-10的表达显著高于对照组。LPS+TRP抑制剂组的IL-1表达显著低于LPS处理组。以上结果表明,鸡温敏TRP离子通道蛋白的分布具有组织和品种特异性,下丘脑TRPV2和TRPV3表达参与家禽体温的中枢调控,肠道TRPV1和TRPV3表达与热应激和免疫应激介导的炎症反应相关。
[Abstract]:The expression of TRPV3 and TRPV3 in the hypothalamus , hippocampus , liver , heart , lung , kidney , intestine , fallopian tube and ovary were studied . The expression of IL - 1 and IL - 10 in chicken embryo intestinal epithelial cells was significantly lower than that in the control group ( P 0.05 ) . The results showed that the expression of TNF - 伪 and TRPV3 was significantly lower than that in the control group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S831

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