淮南麻黄鸡B-F基因多态性种群特征分析与表达产物的抗原性研究

发布时间：2018-04-14 03:03

  本文选题：MHCI + 克隆　； 参考：《安徽农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex class)是存在于脊椎动物特定染色体上的具高度多态性的一组基因群,其编码产物为免疫分子,可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分子。其中,鸡Ⅰ类分子为B-F。α链具有高度多态性,主要由4个结构域组成,即信号肽、胞外区(α1、α2和α3)、跨膜区(TM)和胞浆区(Cyt)。在α1与α2区域内存在肽结合区(PBR),它能与抗原短肽结合。由于MHC分子的多态性,导致了动物机体对特定病原体抵抗力的不同,并影响生长发育等经济性状。鸡不同品种在进化中因分布于不同区域,受到不同环境因素包括疫病等压力影响,形成了外形、生产性能等方面的较大差异。MHC分子在演变中也受到影响。在各类研究中,安徽地方品种淮南麻黄鸡Mhc基因特性未有涉及。为此,本研究对淮南麻黄鸡Mhc Ⅰ (B-F)进行了分子克隆,研究了该分子的特征以揭示该品种的MHC分子进化规律。首先,抽提淮南麻黄鸡50羽个体的血细胞总RNA,之后扩增cDNA,连接载体后转化感受态细胞,挑阳性克隆送测序鉴定。结果显示,克隆到大小分别为1136bp的B-FA基因片段和396bp的B-FB基因片段,测序获得了34条B-FA的cDNA序列和15条B-FB的cDNA序列。应用生物信息学软件分析B-FA和B-FB基因结构和多态性特征,结果表明,B-FA的ORF大小有两种,一种大小为1068bp,另一种大小是1035bp,分别编码356个氨基酸(aa)和345个aa。经比对分析发现,两者都含有信号肽(21aa)、α1(88aa)、α2(91aa)和α3(91aa),不同之处在TM/Cyt区域,是由于第7外显子缺失。相比之下B-FB基因则比较保守。其次,构建含B-F基因的重组质粒,转化大肠杆菌后诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,B-FA基因表达产物以包涵体形式存在为主,B-FB基因表达产物以可溶性蛋白的形式存在为主。它们的分子量分别为52.1kDa、33.0 kDa。用纯化的蛋白免疫小鼠,获得了鼠抗鸡B-F多克隆抗体,并通过免疫印迹进行了抗体的特异性检测,表明抗体能与目的蛋白特异性结合。最后,构建含B-F基因的重组真核质粒,转染293T细胞,随后观察瞬时表达特性,发现它们均能在细胞浆膜区表达定位。以上结果为进一步研究淮南麻黄鸡分子进化规律、B-F分子携带抗原肽的原理及后续基因疫苗的制备提供了实验基础。
[Abstract]:Major histocompatibility complex, a major histocompatibility complex, is a highly polymorphic group of genes found on specific chromosomes in vertebrates. Its coding products are immune molecules, which can be classified into 鈪，

本文编号：1747400