QX型鸡传染性支气管炎弱毒苗的制备及其安全性与免疫效力初步评价
本文选题:传染性支气管炎 + 弱毒疫苗 ; 参考:《山东农业大学》2015年硕士论文
【摘要】:鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一类急性、高度接触传染性疾病。弱毒活疫苗主要用于该病的防御,但常用IB疫苗已不能对流行株提供有效的免疫保护,开展能对流行毒株提供有效保护的弱毒疫苗的研究势在必行。本试验所用毒株SDZB0808是在山东某鸡场商品肉鸡中分离得到。对SDZB0808全基因组测序和遗传演化分析表明该毒株属目前我国主要流行株;交叉中和实验结果表明该毒株抗原谱较广,产生的抗体能和多种血清型抗原发生交叉中和反应,适合作为候选疫苗毒株。SDZB0808在SPF鸡胚被连续传代致弱,本研究对获得不同代次的子代病毒进行致弱效果分析,P100和P110均有良好的保护效果。对SDZB0808毒株和P100进行全基因序列分析:从P62开始,以后的每个代次都在3244-3273位点连续性缺失30个核苷酸,导致ORF 1a编码的蛋白在906-915位缺失10个氨基酸。根据传代前后基因型的缺失差异,设计特异性引物,没有氨基酸缺失的基因组命名为QD基因组,缺失氨基酸的基因组为RD基因组;利用SYBR Green I实时荧光定量检测方法对P60、P100和P110存在的不同基因组进行定量分析。研究结果表明两种基因组在不同代次中存在的比例不同,且呈逐步下降的趋势。SDZB0808毒力致弱可能与其基因组序缺失10个氨基酸有关,在鸡胚上传代致弱的机理可能是鸡胚对弱毒基因的定向选择性筛选的结果。具体的定向筛选弱毒基因机制还有待进一步研究。本研究对初步筛选的P100进行疫苗相关的初步评价,P100以105.5EID50点眼、滴鼻免疫3日龄SPF鸡后,试验鸡与对照组均精神良好,无明显临床症状和病理变化,气管和肾脏组织也无病理组织学损伤,发病率与死亡率均为0%,表明P100对雏鸡无致病性,具有良好的安全性。P100以104.5EID50点眼、滴鼻免疫SPF鸡,2周后用同源强毒SDZB0808和异源强毒SDIB821/2012分别攻毒,攻毒剂量106.0EID50。结果表明:P100免疫过的鸡对强毒的攻击具有100%的临床保护。P100在鸡体内连续传代5代,每个代次的试验鸡均无临床特征出现,精神良好,收集各个代次的病料进行RT-PCR检测,结果为阳性,接种10 d SPF鸡胚,鸡胚出现明显的病理变化,这表明P100具有良好的稳定性,鸡胚传代后毒力无返强。综上所述,初步评价P100对鸡安全性良好,免疫效力合格,并且毒力稳定,可以作为IBV弱毒疫苗候选株。
[Abstract]:Infectious bronchitis (IBV) is an acute and highly contagious disease caused by infectious bronchitis virus (IBV).The attenuated live vaccine is mainly used for the defense of the disease, but the commonly used IB vaccine can no longer provide effective immunity protection to the epidemic strain, so it is imperative to carry out the research on the attenuated virus vaccine which can provide the effective protection for the epidemic strain.The virus strain SDZB0808 was isolated from commercial broilers in a chicken farm in Shandong province.The SDZB0808 genome sequencing and genetic evolution analysis showed that the strain was the main prevalent strain in China, and the cross-neutralization test showed that the antigen-spectrum of the strain was wide, and the antibody produced could cross neutralize with many serotypes of antigens.SDZB0808 is suitable to be used as a candidate vaccine strain to weaken continuously in SPF embryo. In this study, we analyzed the weakening effect of P100 and P110 on different generations of progenies. Both P100 and P110 have good protective effects.The whole gene sequence of SDZB0808 strain and P100 was analyzed. From P62 onwards, 30 nucleotides were continuously deleted at 3244-3273 in each generation, which resulted in the deletion of 10 amino acids at the 906-915 position of the protein encoded by ORF 1a.According to the difference of genotype deletion before and after passage, specific primers were designed. The genome without amino acid deletion was named QD genome, and the missing amino acid genome was Rd genome.The different genomes of P60 P100 and P110 were quantitatively analyzed by SYBR Green I real-time fluorescence quantitative detection.The results show that the proportion of the two genomes in different generations is different, and the tendency of decreasing gradually. The virulence of SDZB0808 may be related to the deletion of 10 amino acids in the genome.The mechanism of debilitating in chicken embryos may be the result of selective screening of virulent genes in chicken embryos.The specific mechanism of directed screening of attenuated genes remains to be further studied.In this study, the preliminary evaluation of vaccine related to P100 was carried out. After 3 days of SPF chickens were immunized with 105.5EID50, the experimental chickens and the control group were both in good spirits and had no obvious clinical symptoms and pathological changes.There was no histopathological injury in trachea and kidney, and the morbidity and mortality were 0, which indicated that P100 had no pathogenicity and had good safety with 104.5EID50.SPF chickens were inoculated by nasal drip for 2 weeks with homologous SDZB0808 and heterotoxic SDIB821/2012 at 106.0 EID50.The results showed that the broilers immunized with 1: P100 had 100% clinical protection. P100 was passed on for 5 consecutive generations in chickens. The tested chickens of each generation had no clinical characteristics and were in good spirits. The disease materials of each generation were collected for RT-PCR detection.The results showed that P100 had a good stability and the virulence of chicken embryo was not strong after passage. The results showed that there were obvious pathological changes in chicken embryo after 10 days inoculation with chicken embryo, which indicated that P100 had good stability and the virulence of chicken embryo was not strong after passage.In conclusion, P100 could be used as a candidate for IBV attenuated vaccine because of its good safety, qualified immunity and stable virulence.
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S852.4
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,本文编号:1750939
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