pSIP-409-FaeG-DC重组乳酸菌对仔猪大肠杆菌腹泻的免疫保护作用研究

发布时间：2018-04-25 01:05

本文选题：大肠杆菌 + 腹泻　；参考：《吉林农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：大肠杆菌性腹泻在猪养殖业中是一种常见的疾病,造成了猪养殖业的巨大经济损失。而在大肠杆菌性腹泻当中,由ETEC引起的腹泻尤为常见,特别是在仔猪断奶时期,体内体外各种因素都发生变化的时候也是腹泻易发、多发的时机。pSIP-409-FaeG-DC重组乳酸菌是由课题组前期制备并保存。该重组菌是将K88菌毛上的FaeG基因融合DCpep,再连接pSIP-409载体导入乳酸菌中进行表达,已经在小鼠身上证实了免疫效果。本研究在此基础之上,利用已经合成好的基因工程重组乳酸菌pSIP-409-FaeG-DC运用到仔猪临床,研究重组乳酸菌对仔猪腹泻的免疫保护作用,评价此乳酸菌在将来用于疫苗生产的可能性。具体研究内容和结果如下:先是确定最佳攻毒剂量。将12头仔猪随机分成3组,每组4头,分别灌服不同浓度的大肠杆菌菌液来诱导仔猪腹泻,具体将浓度设定为6×107CFU/mL、6×108CFU/mL、6×109CFU/mL,观察各组仔猪的腹泻程度,计算腹泻率,仔猪腹泻的程度通过粪便计分来反映,结果表明,6×109CFU/mL为最佳攻毒剂量。在确定好最佳攻毒剂量之后进行了重组乳酸菌的免疫保护效果研究。选择40头(28±2)日龄的杜×长×大断奶公猪,平均体重为(8.06±0.31)kg,随机分成A、B、C、D组,每组10头。第一周进行免疫,A组每天口服MRS培养基,B、C两组口服乳酸菌制剂(每日摄入量为5×108 CFU),均采用水拌料的形式,将试剂加入饮水中与饲料充分混合后饲喂仔猪,D组不做任何处理;第二周ETEC攻毒,A、B两组灌服6×109CFU/mL大肠杆菌5mL,C组灌服生理盐水5mL,D组不做处理。两周后全部屠宰。试验期间测定体重的变化、料重比来反映生长性能,观察并统计粪便计分以及血常规,测定重组乳酸菌对腹泻的缓解作用。此外,屠宰后进行了肠道内容物检测、制作了病理切片、将肠绒毛放置在扫描电镜下,从微观层面进行了观察分析,并进行了MTT淋巴转化实验测其对免疫的影响。试验结果显示,A组体重明显下降,B组体重也有一定下降,C组与D组体重正常增长,差异性不显著(P㧐0.05),体重变化结果说明乳酸菌起到了良好的保护作用,有效缓解了仔猪腹泻;A组的料重比高于B组,说明B组仔猪的生产性能高于A组,但差异性不显著(P㧐0.05),料重比和抗腹泻能力指数表明乳酸菌制剂在一定程度上能缓解仔猪的腹泻症状,但在提高生产性能上的作用不是特别显著;从肠道内容物监测结果来看,A组的大肠杆菌数量与B组差异极显著(P㩳0.01),A组明显多于B组,A、B两组的非厌氧菌与B、C两组差异极显著(P㩳0.01),A、B两组数量明显多于C、D两组,检测表明,该重组乳酸菌能减少肠道大肠杆菌的数量,提高益生菌的数量;从病理切片可得知,重组乳酸菌对肠道有良好的保护效果;从肠绒毛扫描电镜图可看出,该重组乳酸菌在微观层面也起到了良好的保护作用,能够保护绒毛免受ETEC的侵害;根据淋巴细胞转化试验结果,B组仔猪外周血中淋巴细胞增殖能力和A组相比差异极显著(P㩳0.01),从整体效应上证明了该微生态制剂能提高机体的整体免疫力。综上,该重组乳酸菌能提高仔猪的生长性能,减缓腹泻症状,保护肠绒毛,提高机体的免疫力,是一种效用显著的微生态制剂,为ETEC疫苗的研发打下了坚实的基础。
[Abstract]:The effect of recombinant lactic acid bacteria on diarrhea of piglets was studied by using recombinant lactic acid bacteria pSIP - 409 - FaeG - DC . The results showed that the number of E . coli in group A was significantly higher than that in group A , but the difference was not significant ( P ? 0.05 ) .

【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28

【参考文献】