牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

发布时间：2018-04-28 13:31

  本文选题：IBRV + gB基因　； 参考：《畜牧兽医学报》2006年12期

【摘要】：经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。
[Abstract]:The recombinant protein was cloned , identified and sequenced . The results showed that the specific sensitivity and the coincidence rate were 83 . 3 % , 90 . 9 % and 92 . 5 % respectively .

【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
【基金】：“863”计划(2003AA41110) 黑龙江省重大攻关项目(GA02B501)
【分类号】：S854.4;S852.65

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1815472