奶牛X-Y精子特异性表达蛋白的筛选

发布时间：2018-05-02 17:07

本文选题：奶牛 + X、Y精子　；参考：《塔里木大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究奶牛X、Y精子特异性蛋白,可以为奶牛的性别控制、胚胎性别鉴定及性控疫苗研发技术提供理论依据。研究采用流式细胞仪分选西门塔尔奶牛精子,利用人工授精技术验证奶牛X、Y精子的分离效果,比较Trizol、TCA-丙酮、尿素盐酸胍三种蛋白裂解法,获得最优精子蛋白裂解效果;同时优化蛋白双向电泳关键参数,建立奶牛X、Y精子特异性蛋白双向电泳体系,筛选X-Y精子特异性表达蛋白,利用蛋白Q Exactive mass spectrometer质谱鉴定和生物信息学预测获得差异蛋白的定性和功能分析。结果如下:(1)流式细胞仪分离精子获得纯度达96%西门塔尔奶牛X、Y精子,实验室检测奶牛X精子、Y精子、常规精子组活率的精子活率(43.81%、41.49%、46.16%)与精子顶体完整率(56.54%、58.21%、58.10%)差异均不显著;X精子组19头青年母牛人工授精获得13头雌性犊牛,Y精子组20头青年母牛人工授精得到14头雄性犊牛,性别符合率为100%。(2)采用Trizol裂解法对3.0×107个精子裂解获得蛋白条带16个多于TCA-丙酮法(10个条带)和尿素盐酸胍法(7个条带)。采用改进后IEF(等电聚焦)程序、pH4-7的IPG胶条、银染图谱获得更多独立蛋白点,其效果优于改进前IEF程序、p H3-10的IPG胶条、考染图谱。(3)X、Y精子检测到特异性表达蛋白点25个,其中X精子上有10个,Y精子上有15个;特异选取3个X精子和3个Y精子特异性表达蛋白点质谱鉴定结果,位于X精子2个蛋白分别为推定组蛋白H2B(histone H2B type 2-F-like)和推定14-3-3Z蛋白(14-3-3 protein zeta/delta isoform X1),均位于细胞核内,无跨膜结构,位于Y精子特异性表达蛋白点为推定载脂蛋白A-I序列(apolipoprotein A-I preproprotein),位于细胞膜外,但无跨膜结构。其它3个未命名蛋白序列分别为暂未命名蛋白序列1、暂未命名蛋白序列2无没有发现跨膜,暂未命名蛋白序列3具有跨核膜的结构。结论:流式细胞分选奶牛的X、Y精子可以达到性控有效性;利用稳定、高效的双向电泳程序获得X精子特异性表达蛋白10个,Y精子特异性表达蛋白15个;质谱鉴定6个特异性表达蛋白其序列均为亲水性,具有抗原决定簇,它们与精子生成、获能、代谢和信号转导有关,推定组蛋白H2B、载脂蛋白A-I与奶牛雄性不育相关,但6个蛋白序列均不能完全满足疫苗候选蛋白条件。
[Abstract]:The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The sperm motility rate ( 43.81 % , 41.49 % , 46.16 % ) and the sperm acrosome intact rate ( 56.54 % , 58.21 % , 58.10 % ) were compared with that of Trizol , TCA - acetone and urea guanidine hydrochloride . ( 3 ) There were 25 specific expression proteins in X and Y sperm , 15 in X - sperm , 15 in Y - sperm , 3 X - sperm and 3 - 3 - 3Z protein ( 14 - 3 - 3 protein zeta / delta X1 ) , respectively .

【学位授予单位】：塔里木大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S823

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