CyclinA2在猪卵母细胞完成减数分裂中的作用研究

发布时间：2018-05-07 13:00

  本文选题：细胞周期蛋白A2 + 蛋白磷酸酶2A　； 参考：《西北农林科技大学》2016年硕士论文

【摘要】：在卵母细胞减数分裂进程中,细胞周期蛋白A2(CyclinA2)可与不同CDK激酶相互作用,并通过其周期性的表达和降解,参与调控细胞周期。为了探讨CyclinA2基因在猪卵母细胞完成减数分裂中的作用,本研究分别通过超表达和抑制CyclinA2的活性来进行研究。1.分别构建了野生型pVenus-CyclinA2和非降解型pVenus-DN157CyclinA2真核表达载体,转染至hela细胞后均能正常表达。2.将重组载体体外转录为cRNA,进行猪卵母细胞的定量显微注射。发现注射后的猪卵母细胞4 h后开始表达绿色荧光,至42 h成熟时荧光持续存在,说明表达的外源性CyclinA2可以逃避自身的降解机制。3.减数第一次分裂中,超表达CyclinA2可抑制第一极体的排出,并且这种阻滞需要相关的CDK1的活性。超表达CyclinA2会使PP2A的活性降低,从而出现染色体的异常分离。抑制CyclinA2活性也抑制第一极体的排出,并使得PP2A活性升高,还可引起纺锤体形态异常。表明恰当的CyclinA2活性可通过调控PP2A和维持纺锤体的形态完成同源染色体的正常分离。4.减数第二次分裂中,过表达CyclinA2并不影响猪卵母细胞的卵裂和发育。而抑制CyclinA2的活性会引起卵子不能卵裂。这说明CyclinA2的活性对于卵子完成减数第二次分裂也是至关重要的。综合以上研究结果,在减数第一次分裂中CyclinA2通过自身的降解影响PP2A活性从而确保染色体的正常分离。而减数第二次分裂中CyclinA2的活性对于卵裂的发生是必需的。这为我们进一步研究CyclinA2参与染色体分离调控的分子机制奠定了基础。
[Abstract]:In the process of oocyte meiosis, cyclin A2 (CyclinA2) can interact with different CDK kinase and regulate cell cycle through its periodic expression and degradation. In order to explore the role of CyclinA2 gene in the meiosis of porcine oocytes, this study has overexpressed and inhibited the activity of CyclinA2, respectively. To study.1., wild type pVenus-CyclinA2 and non degrading pVenus-DN157CyclinA2 eukaryotic expression vector were constructed respectively. After transfected to HeLa cells, the recombinant vector could be normally expressed in vitro and transcribed to cRNA in vitro, and the porcine oocyte was injected into a quantitative microinjection. It was found that the porcine oocyte after 4 h began to express green fluorescence. 42 h mature when the fluorescence persists, indicating that the expression of exogenous CyclinA2 can escape from its own degradation mechanism.3. in the first division, the overexpression of CyclinA2 can inhibit the discharge of the first polar body, and this block needs related CDK1 activity. The overexpression of CyclinA2 will reduce the activity of PP2A, thus the abnormal separation of chromosomes appears. Inhibition of CyclinA2 activity also inhibited the discharge of the first polar body and increased the activity of PP2A, and also caused abnormal spindle morphology. It indicated that the appropriate CyclinA2 activity could complete the normal separation of homologous chromosomes by regulating PP2A and maintaining the spindle morphology in the second division of the.4. meiosis, and overexpression of CyclinA2 did not affect porcine oocytes. Cleavage and development. Inhibition of the activity of CyclinA2 causes the egg's inability to cleavage. This indicates that the activity of CyclinA2 is also crucial to the completion of the second division of the egg. The results of the above study, in the first division, affect the normal separation of the chromosomes by affecting the PP2A viability by the degradation of CyclinA2 in the first division. The activity of CyclinA2 in the number of second divisions is necessary for cleavage. This provides a basis for our further study of the molecular mechanism of CyclinA2 participation in chromosomal separation and regulation.

【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828

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