鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

发布时间：2018-05-12 20:35

  本文选题：鸭型甲肝病毒亚型 + 单克隆抗体　； 参考：《中国畜牧兽医》2017年02期

【摘要】：为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原,建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性,获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1A2和5G3)。MAbs腹水ELISA效价分别为1∶3.2×104和1∶2.0×106。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blotting结果显示,2株MAbs均能与DHAV-1aVP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验结果显示5G3株具有中和活性。结果表明2株MAbs的ELISA效价高、特异性强、稳定性好,均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应,其中一株具有中和活性。
[Abstract]:In order to prepare the monoclonal antibody against DHAV-1a) structural protein VP1 of duck hepatitis A virus (DHAV-1a), we immunized BALB/c mice with pGEX-VP1 recombinant protein and purified concentrated whole virus as coating antigen. An indirect ELISA method for screening hybridoma cell lines with anti VP1 protein was established. After fusion, hybridoma cells were prepared, and their biological activities such as stability, specificity, ascites titer and neutralization activity were identified, including the stability, specificity, ascites titer and neutralization activity of MAbs. The ELISA titers of two hybridoma cells with persistent and stable antibody secretion were 1: 3.2 脳 10 ~ 4 and 1: 2.0 脳 10 ~ 6, respectively, and the ELISA titers of 5G3).MAbs ascites were 1: 3.2 脳 10 ~ 4 and 1: 2.0 脳 10 ~ 6, respectively. The results of IgG1/ 魏 type. Western blotting showed that the two strains of MAbs could react specifically with DHAV-1aVP1 protein and DHAV-1a virus. The results of specificity test showed that two strains of MAbs could cross react with DHAV-1 and DHAV-1a. Neutralization test showed that 5G3 strain had neutralization activity. The results showed that the two MAbs strains had high ELISA titer, strong specificity, good stability, and could react specifically with DHAV-1 and DHAV-1a viruses, and one of them had neutralizing activity.
【作者单位】： 福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心;福建省禽病防治重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31472222) 现代农业产业技术体系建设专项(CARS-43) 福建省公益类科研院所专项(2014R1023-3、2015R1023-3和2016R1102) 福建省农业科学院畜牧兽医研究所基金(MYQJ2015-6) 福建省优良蛋鸭品种与设施化养殖创新产业化工程项目(2014-2016)
【分类号】：S852.65

【参考文献】

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本文编号：1880065