O型口蹄疫病毒单域抗体的筛选和鉴定及其在口蹄疫检测中的应用

发布时间：2018-05-17 08:22

  本文选题：O型口蹄疫病毒 + 噬菌体展示　； 参考：《中国农业科学院》2015年硕士论文

【摘要】：口蹄疫是一种急性、烈性、高度接触性传染病,由口蹄疫病毒感染所引起。包括猪、牛等在内的偶蹄兽动物动物为其易感宿主,对全球的畜牧业造成了巨大的损失。口蹄疫分为O、A、C、AsiaⅠ、SAT-1、SAT-2和SAT-3七个血清型。其中,O型口蹄疫是全球最主要的流行亚型。近几年来在我国及周边国家多次爆发O型口蹄疫,造成了重大经济损失。这迫切要求我们高度重视O型口蹄疫的流行,并加快O型口蹄疫的基础研究和防控技术的开发。骆驼科动物的血清中除了存在常规抗体外,还存在天然缺失轻链的重链抗体。重链抗体的重链可变区,被称为单域抗体或者纳米抗体,可独立行使其抗原结合能力。单域抗体具有物理化学性质稳定、可溶性好、分子量较小、易于改造、易于在微生物系统中表达等优点,现已被应用于肿瘤诊断、疾病治疗、药物开发等领域中。在本项研究中,我们使用O型口蹄疫灭活苗免疫双峰驼,构建了抗O型口蹄疫病毒的单域抗体噬菌体展示免疫文库。经测定,文库容量为1.2×108。经过四轮淘选,测序得到两株单域抗体序列,分别命名为sdAb-1和sdAb-2。目的片段扩增后经过酶切后与pSMK载体连接,构建pSMK-sdAb-1和pSMK-sdAb-2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(coden plus)。经SDS-PAGE检测,重组sdAb-1和sdAb-2得到了表达。重组蛋白使用树脂亲和层析方法进行纯化。双抗夹心酶联免疫吸附实验结果显示这两株抗体对O型口蹄疫病毒具有特异性结合的能力。表面等离子共振实验结果证明这两株单域抗体与O型口蹄疫病毒抗原的平衡解离常数为8.24×10-9和6.23×10-9,属于高亲和力抗体。间接免疫荧光实验显示量子点标价的单域抗体可用于检测BHK-21细胞中的口蹄疫病毒。此外,还进行了磁珠标记的单域抗体在O型口蹄疫的PCR和ELSIA的检测方法中应用的初步探索。
[Abstract]:Foot-and-mouth disease (FMD) is an acute, acute and highly contagious disease caused by foot-and-mouth disease virus infection. Cloven-hoofed animals, including pigs and cattle, are susceptible hosts, causing huge losses to animal husbandry around the world. Foot-and-mouth disease (FMD) is divided into seven serotypes of Acanthopsis 鈪，

本文编号：1900653